诺贝尔学术资源网_紫外可见吸光光度法 (2).ppt

第2章
可见和紫外吸光光度法22.1可见吸光光度法概述2.1.1可见吸光光度法的特点：2.1.2光的基本性质(2)光具有能量，能量是量子化的。
E=E2-E1=h
选择性吸收：分子结构的复杂性使其对不同波长光的吸收程度不同（E不同）。
（3）计算吸收1ev能量的波长。
（4）电磁波的分区。可见光区-人的眼睛能感觉到的光（380-780nm).量子化特征能级的跃迁使物质对光产生选择性吸收说明：
1、可见光区是分子吸收多种能级跃迁的叠加：
（1）电子能级
（2）振动能级
（3）转动能级
2、电子能级的跃迁是带状光谱。
3、分子的多种能级跃迁是范围较宽的″带状光谱‶。与分子的电子结构有关。
2.1.3物质对光的选择性吸收2.1.4吸收曲线：物质对不同波长光的吸收特性的曲线。（2）对于不同物质，它们的吸收曲线形状和λmax则不同。
（3）不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似λmax不变。（3）吸收曲线可以提供物质的结构信息，是物质的重要的基本特性之一，并作为物质定性分析的重要依据之一。2.2光的吸收基本定律─朗伯-比耳（Larnbert-Beer）定律式中A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度；
b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位；
c：溶液的摩尔浓度，单位mol·L-１；
：摩尔吸收系数，单位L·mol-１·cm-１；
：入射光强度；或:A==abc
c：溶液的浓度，单位g·L-１
a：吸收系数，单位L·g-１·cm-１
a与的关系为：=Ma
（M为摩尔质量）（1）物质的吸光能力的度量
max越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。
>105：超高灵敏；
=(6～10）×104：高灵敏；
=104～103：中等灵敏；
<103：不灵敏。
（2）摩尔吸收系数在数值上等于浓度为
1mol·L-1、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。（例题1：p6）透光度T:描述入射光透过溶液的程度.
T=I/I0
吸光度A与透射比
T的关系:(1)吸光度A与透射比T的关系是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。
(2)吸光度具有加和性。朗伯—比耳定律的相关符号：2.3可见分光光度计简介2.3可见分光光度计简介分光光度计232.3.1可见分光光度计的主要部件和结构2.单色器26②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；
③色散元件：棱镜或光栅,
将复合光分解为依波长顺序排列的光谱，形成单色光;实际上理想的100%的单色光是不可能达到的，只能获得的是具有一定“纯度”的单色光，即该“单色光具有一定的有效带宽。有效带宽越小，分析的灵敏度越高、选择性越好、分析物浓度与光学响应信号的线性相关性也越好。
3.样品室-4.检测系统(1)光电管(2)光电二极管阵列优点：光电流直接正比于辐射能；
使用方便、便于携带（耐用、成本低）；
缺点：电阻小，电流不易放大；响应较慢。
只在高强度辐射区较灵敏；长时间使用后，有“疲劳”(fatigue)现象。有关朗伯—比耳定律的计算：
讨论例题2-6。2.4分析方法的建立2.4.3显色剂372.配位显色反应
当金属离子与有机显色剂形成配合物时，通常会发生电荷转移跃迁，产生很强的紫外—可见吸收光谱2.4.2显色反应条件的选择2.反应体系的酸度
在相同实验条件下，分别测定不同pH值条件下显色溶液的吸光度。选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的pH范围。反应体系的酸度是显色反应最重要的条件。
3.显色时间与温度2.4.4干扰的消除(2）选择适当的显色条件以避免干扰。例用磺基水杨酸测定Fe（Ⅲ）离子时,Cu（Ⅱ）与试剂形成黄色络合物,干扰测定，但如控制pH在2.5左右Cu（Ⅱ）则不与试剂反应。
（3）分离干扰离子.2.4.5吸光度测量条件的选择如图选500nm波长测定，A的灵敏度虽有所下降，但消除了B的干扰，提高了测定的准确度和选择性2.参比溶液的选择选择参比溶液所遵循的一般原则：
⑴若仅待测组分与显色剂反应产物在测定波长处有吸收，其他所加试剂均无吸收，用纯溶剂（水)作参比溶液；⑶若待测试液在测定波长处有吸收，而显色剂等无吸收，则可用“试样空白”(不加显色剂)作参比溶液；
⑷若显色剂、试液中其他组分在测量波长处有吸收,则可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，作为参比溶液。（例题9）3.吸光度读数范围的选择Δc/c不仅与仪器的透射比误差ΔT有关，而且与其透射比读数T的值也有关。
是否存在最佳读数范
围？何值时误差最
小？最佳读数范围与最佳值:2.5可见吸光光度法的应用标准曲线的制作
具体方法为:在选择的实验条件下分别测量一系列不同含量的标准溶液的吸光度，以标准溶液中待测组分的含量为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条通过原点的直线，称为标准曲线，此时测量待测溶液的吸光度，在标准曲