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光谱分析仪器光谱分析仪器原理:光谱分析技术光谱分析仪器---检验医学应用的光谱仪器紫外可见分光光度计利用物质分子吸收光谱分析技术荧光分光光度计利用物质分子荧光光谱分析技术原子吸收分光光度计利用物质原子吸收光谱分析技术原子发射光谱仪利用物质原子发射光谱分析技术光谱分析技术基础理论------光学 几何光学----显微镜的原理 光的波动性理论波动光学---单色器的原理:衍射、干涉 光的吸收、发射理论量子理论----互补色----两种颜色的光按照一定比例混合在一起呈白色,这两种颜色称互补色光谱(Spectral):复合光经过色散系统分光后,单色光按波长大小而依次排列的图光谱分析技术中常见光谱名称物质吸收连续光谱中某些波长的光产生的光谱称作吸收光谱,包括分子吸收光谱和原子吸收光谱。分子和原子吸收光谱产生原理及区别光谱分析技术---吸收光谱分析技术发射光谱概念、原子发射产生原理分子发射(荧光)光谱最大特征具有两个光谱----激发光谱和荧光光谱1、激发光谱曲线 固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的荧光(磷光)强度与照射光波长的关系曲线(图中曲线I)。光谱分析技术---发射光谱分析技术光致发光分子荧光 热致发光原子发射光谱 电致发光 化学发光CL、ECL 光谱分析技术类型与光谱分析仪的关系光谱分析技术---定量分析原理光谱分析技术---定量分析原理1.单色光(入射光是单色光;) 浓度计算方法 1、标准比较法CU=AU*CS/AS 2、标准曲线法Y=Ax+b发射(散射)光强度不遵从朗伯-比尔定律医学检验常用光谱分析仪器光谱分析仪类型及常用光谱分析仪(1)、光源氙灯钨灯、卤钨灯----连续光谱320—2500nm氢灯和氘灯----连续光谱185—375nm氙灯----紫外可见区连续光谱汞灯----254—734nm离散线光谱空心阴极灯----单波长线光谱原理及类型带通滤光片单色器(Monochromator):能将来自光源的复合光分选出所需波长的的单色光光束的一种装置,是许多光谱分析仪器的一个核心结构。1、入光狭缝 2、出光狭缝 将复合光中不同波长(颜色)的光在空间上分开的装置A、棱镜非线性光谱光栅类型汇聚光线类型及作用几种常用检测器光谱分析仪器的光学系统---检测器常用分子吸收光谱仪:紫外可见分光光度计 常用分子发射光谱仪:荧光分光光度计概念(1)、光源钨灯、卤钨灯----连续光谱320—2500nm(最常用)氢灯和氘灯----连续光谱185—375nm氙灯----紫外可见区连续光谱(光谱能量分布最理想)仪器基本结构----不适用的光源单色器仪器基本结构----样品单元仪器基本结构----检测器仪器类型按光学系统分类光源比值T/T0单波长双光束分光光度计双波长分光光度计双波长分光光度计原理影响分光光度法准确性的因素(一)单色性不纯的影响 单色器的类型和质量不好 狭缝宽度不当 (二)杂散光的影响: 有两种杂散光: 1)杂散光的波长与测量波长相同 它可能不通过样品就射到光检测器上 2)从单色器出口狭缝发出的包含少量的与仪器所表示的波长不相等的光(三)吸收池 吸收池的质量不好 吸收池使用保管不善--透光面被污染上油污、指纹、沉淀,吸收池与光路不垂直等 吸收池不配套(四)电压、检测器负高压波动的影响 电源电压波动---光源光强波动 电源电压波动---检测器噪声增大 (五)其它因素的影响 吸光度读数刻度误差、仪器安装环境(如振动、温度变化)、化学因素(如荧光、溶剂效应等)等也可影响捡测结果的准确度。紫外-可见分光光度计性能评价指标发光激发类型 光激发发光荧光分光光度计 化学激发发光---免疫检验仪器----化学发光免疫分析仪 包括CL和ECL 激发光谱和荧光光谱 任何发射荧光的物质都具有两个特征光谱,即激发光谱和荧光光谱(1)、光源常用分子发射光谱仪--荧光分光光度计(1)、激发单色器常用分子发射光谱仪--荧光分光光度计常用原子吸收光谱分析仪---原子吸收分光光度计子吸收光谱仪分光系统示意图常用原子吸收光谱分析仪---原子吸收分光光度计常用原子光谱分析仪---原子发射光谱仪激发类型 热致发光火焰光度计ICP 电致发光交流(直流)电弧原子摄谱仪 6400A火焰光度计