微生物次生代谢产物研究方法-3.ppt

第三讲色谱学原理与实际应用（2）－－非常压色谱3.1减压柱层析（抽柱VacuumLiquidChromatography)3.2中低压柱层析2）低压柱

适用样品：10mg～1g
压力小于5bar
固定相：硅胶、氧化铝、聚酰胺、反相硅胶等各种分离材料，普通粒度，因此在低压下也有较快流速。吸附也不是特别严重。
一般配有自动收集器、紫外监测器和低压恒流泵/氮气瓶，有的还可联机监控、操作和分析。
有些商品化的预制色谱柱，如E.Merck公司产的Lobar柱系列产品（粒度150～250目），其分离效果有时可接近HPLC的分辨率，但载样量远超过制备型HPLC。
也可自己装填。
2）中压液相色谱系统（Medium-pressureLC）

适用样品：100mg～100g
压力5～40bar
固定相：硅胶、氧化铝、聚酰胺、反相硅胶等各种分离材料，较细较均匀颗粒（硅胶常直接用薄层层析材料（粒度15um，约700目）），分辨率很高，但常压下基本流不动，在中压下才有较快流速。有一定程度的吸附。
均配有自动收集器、紫外监测器和压力输液泵，有的还可联机监控、操作和分析。如BUCHI公司生产的中压液相系统，还配有一系列规格的耐压玻璃－塑料加强色谱柱，其中有些为预制柱，如反相柱，有些可自己装填分离材料。还可选配其它类型的监测器如示差折光监测器。
2操作
a装柱（氮压）
b上样（干法或湿法，样品柱）
c洗脱（所有管材均耐压耐溶剂）
d收集（较智能化自动收集，等时间或按峰收集）3.3高压液相色谱系统（HighPressureLC，HighPerformanceLC）固定相：
一般为
化学键合
固定相检测器HPLC用途分析型、半制备型、制备型HPLCRP-HPLC使用方法举例：等度/梯度洗脱的选择RP-HPLC分离效果的优化分离度与溶剂强度的关系降低流速也可以提高塔板数，改善分离度
延长梯度时间也可改善分离度
更换流动相系统（分离因子a)困难样品：多元梯度小结谱峰拖尾定性与定量分析定量分析利用PDAD检测器检验化合物或色谱峰的纯度3.4气相色谱应用简介GC特点与在天然产物研究中应用化合物色谱分离手段小结谢谢大家！