第八章高效液相色谱的色谱柱和流动相.ppt

高效液相色谱的色谱柱和流动相色谱柱硅胶色谱柱填料的优势
硅胶有良好的机械强度
硅胶的孔结构和比表面积容易控制
硅胶填料具有比较好的化学稳定性和热稳定性
硅胶表面具有丰富的硅羟基，可以进行化学键合修饰
硅胶色谱柱填料的残余硅羟基效应
碱性分析物严重拖尾，分离度低。反相色谱柱填料保留性能随温度的变化提高硅胶基质反相色谱填料的色谱性能
提纯硅胶，利用高纯(99.999%)硅胶色谱填料
对硅胶进行充分封端（尾）
利用空间位阻掩蔽残余硅羟基
键合相分子中嵌入极性基团（胺基、脲基、酰胺基）
双齿键合相高效液相色谱的流动相高效液相色谱方法的选择色谱条件的影响40度
169barSB-C84.6X75mm3.5um
866953-906
流通池:5mm,2.5uL
20~60%B(10min.)
2mL/min.5um
色谱柱尺寸:4.6x50mm-CN液相色谱键合相的类型和色谱性质的主要影响因素高效液相色谱键合固定相的类型1、硅-氧-碳键型固定相
制备方法之一：
高压、过量醇、280度条件下与硅胶的硅羟基发生反应。
制备方法之二：
亚硫酰氯处理硅胶获得表面氯化硅胶，再与过量醇进行醇解反应。
缺点：容易被水解
2、硅-氮-碳键型固定相
制备方法：
先将硅胶表面氯化，再使伯胺与氯化硅胶反应。
对有机溶剂和pH=3-8的水介质稳定。3、硅-氧-硅-碳键型固定相
制备方法：
硅胶表面的硅羟基与有机氯硅烷或有机硅氧烷进行硅烷化反应。
对有机溶剂和pH=2-8.5的水介质是稳定的。
4、硅-碳键型固定相
制备方法：
氯化硅胶和有机锂或格氏试剂反应。
稳定性优于硅-氧-碳键型固定相，但生成的产物覆盖度较低。键合固定相的性质2、键合相链长的影响
对于反相色谱固定相键合相链长越长保留越强
对于正相色谱固定相链长的影响不明显。
3、键合固定相基质性质的影响
基质的种类、表面积、化学性质影响键合量、覆盖度等，都会对键合相有一定的影响。

高效液相色谱的色谱柱和流动相色谱柱硅胶色谱柱填料的优势
硅胶有良好的机械强度
硅胶的孔结构和比表面积容易控制
硅胶填料具有比较好的化学稳定性和热稳定性
硅胶表面具有丰富的硅羟基，可以进行化学键合修饰
硅胶色谱柱填料的残余硅羟基效应
碱性分析物严重拖尾，分离度低。反相色谱柱填料保留性能随温度的变化提高硅胶基质反相色谱填料的色谱性能
提纯硅胶，利用高纯(99.999%)硅胶色谱填料
对硅胶进行充分封端（尾）
利用空间位阻掩蔽残余硅羟基
键合相分子中嵌入极性基团（胺基、脲基、酰胺基）
双齿键合相高效液相色谱的流动相高效液相色谱方法的选择色谱条件的影响40度
169barSB-C84.6X75mm3.5um
流通池:5mm,2.5uL
20~60%B(10min.)
2mL/min.5um
色谱柱尺寸:4.6x50mm-CN柱液相色谱仪器的维护液相色谱仪器的维护和维修过滤有机相流动相用有机（聚四氟乙烯）滤膜。
过滤水或盐溶液作为流动相用水相滤膜。
盐溶液作为流动相时，需要先将盐溶解后再进行过滤，不能先过滤完水再溶解盐，防止盐中的固体不溶物堵塞流路。
注意：用于过滤无机流动相的滤膜溶于有机溶剂。样品需要用0.22μm的微孔滤膜进行过滤样品需要用0.22μm的微孔滤膜进行过滤流动相中的固体颗粒和密封圈碎屑会堵塞过滤白头，导致泵压过高，需要及时更换。安捷伦液相色谱仪更换过滤白头密封圈老化、磨碎，导致漏液检测器的维护一
氘灯（寿命2000h左右，价格5000-6000元）
不宜频繁开关开+关=4小时
需要用时才开，不使用时最好关闭
冲柱（平衡或冲洗）时可以不接检测器
一是节省灯的使用，二是防止污染检测器
多数仪器的检测器电源开关在开机时就已打开，但灯的开关并没有开。检测器的维护二
不用时充满有机流动相，如甲醇，乙腈等。
长时间未用在开始使用时检测器内可能会有气泡，现象是检测信号呈锯齿状剧烈大幅度波动，解决方法是快速堵住和放开检测器的出液口，堵住时使其内部压力瞬间增大放开后气泡会被冲出。
检测器（连有进出液两管）被堵，先检查是否是进液管被堵（多数情况下它被堵），用小流速倒冲，出液管连接泵。色谱柱的维护
色谱柱的保存参考购买色谱柱的说明书，一般反相色谱柱（C18，C8等）用色谱纯甲醇或乙腈充满后用堵头密封两头冰箱内保存。
色谱柱在开始使用时（或使用完毕时），用洗脱能力强的流动相冲洗，除去上次使用时（或本次使用时）残留在固定相上的样品污染物等。
色谱柱冲洗过程中最好不接检测器，防止污染了检测器。
色谱柱使用多次后（出现柱压高、柱效低等）参考说明书冲洗再生。色谱柱的正确连接常见商品反相色谱键合固定相流动相中有机组分
含量高时传统的键合和封端（封尾）流动相pH低于2的环境中
传统的键合相分子容易水解而流失，造成色谱柱损伤，具体表现为保留减弱和残余硅羟基效