阿片样物质受体的正向变构调节剂和沉默变构调节剂.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN105008926A
(43)申请公布日2015.10.28

(21)申请号CN201380074246.7

(22)申请日2013.12.20

(71)申请人百时美施贵宝公司
地址美国新泽西州

(72)发明人N.伯福德A.阿尔特

(74)专利代理机构中国专利代理(香港)有限公司

代理人权陆军

(51)Int.CI
G01N33/566

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称
阿片样物质受体的正向变构调节剂
和沉默变构调节剂

(57)摘要
公开了可用于单独或与正构阿片样

物质受体激动剂组合治疗疼痛的mu(μ)-阿
片样物质受体的正向变构调节剂(PAM)和
沉默变构调节剂(SAM)。还公开了用于治
疗疼痛和调节mu(μ)-阿片样物质受体的方
法。

法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.鉴定μ阿片样物质受体正向变构调节剂的筛选方法，其包括以下步骤：

(i)将正向变构调节剂测试化合物和低浓度的μ选择性正构激动剂单独或与式I
(BMS-986123)代表的沉默变构化合物共同添加至细胞；

(ii)测量所述μ选择性正构激动剂和所述测试化合物单独或在所述式I化合物存在
的情况下对所述细胞的效应；和

(iii)如果通过所述测试化合物的正向变构激动剂活性的降低证明所述式I的化合物
显示与所述测试化合物的竞争性结合，则将所述测试化合物鉴定为是正向变构调节
剂。

2.根据权利要求1的方法，其中μ选择性正构激动剂的低浓度选自：

(a)在所述细胞中小于或等于约计算的EC80；

(b)在所述细胞中小于或等于约计算的EC70；

(c)在所述细胞中小于或等于约计算的EC60；

(d)在所述细胞中小于或等于约计算的EC50；

(e)在所述细胞中小于或等于约计算的EC40；

(f)在所述细胞中小于或等于约计算的EC30；

(g)在所述细胞中小于或等于约计算的EC20；

(h)在所述细胞中小于或等于约计算的EC10。

3.鉴定μ阿片样物质受体负向变构调节剂的筛选方法，其包括以下步骤：

(i)将负向变构调节剂测试化合物和高浓度的μ选择性正构激动剂单独或与式I
(BMS-986123)代表的沉默变构化合物共同添加至细胞；

(ii)测量所述μ选择性正构激动剂和所述测试化合物单独或在所述式I化合物存在
的情况下对所述细胞的效应；和

(iii)如果通过所述测试化合物的负向变构激动剂活性的降低证明所述式I的化合物
显示与所述测试化合物的竞争性结合，则将所述测试化合物鉴定为是负向变构调节
剂。

4.根据权利要求3的方法，其中μ选择性正构激动剂的低浓度选自：

(a)在所述细胞中大于或等于约计算的EC10；

(b)在所述细胞中大于或等于约计算的EC20；

(c)在所述细胞中大于或等于约计算的EC30；

(d)在所述细胞中大于或等于约计算的EC40；

(e)在所述细胞中大于或等于约计算的EC50；

(f)在所述细胞中大于或等于约计算的EC60；

(g)在所述细胞中大于或等于约计算的EC70；

(h)在所述细胞中大于或等于约计算的EC80；

(i)在所述细胞中大于或等于约计算的EC90；和

(j)在所述细胞中大于或等于约计算的EC100。

5.根据权利要求1的方法，其中所述细胞是U2OS细胞。

6.根据权利要求5的方法，其中，除了融合至OPRM1的C末端的β半乳糖苷酶的
突变的氨基末端片段以外，所述细胞重组表达融合至β-抑制蛋白2的C末端的β
半乳糖苷酶的N末端缺失突变体。

7.根据权利要求6的方法，其中所述μ选择性正构激动剂是内吗啡肽-I。

8.根据权利要求1的方法，其中所述细胞是CHO细胞。

9.根据权利要求8的方法，其中所述细胞重组表达人μ阿片样物质受体(CHO-μ)。

10.根据权利要求9的方法，其中所述μ选择性正构激动剂是内吗啡肽-I。

11.根据权利要求1的方法，其中所述细胞是C6神经胶质瘤细胞。

12.根据权利要求11的方法，其中所述细胞重组表达人μ阿片样物质受体(C6-μ)。

13.根据权利要求12的方法，其中所述μ选择性正构激动剂是DAMGO。

14.证实正向变构调节剂测试化合物具有μ阿片样物质受体正向变构调节剂活性的
方法，其包括以下步骤：

(i)将正向变构调节剂测试化合物和低浓度的μ选择性正构激动剂单独或与式I
(BMS-986123)代表的沉默变构化合物共同添加至细胞；

(ii)测量所述μ选择性正构激动剂和所述测试化合物单独或在所述式I化合物存在
的情况下对所述细胞的效应；和