中南大学 生物化学 考研课件 ch13 重组DNA 克隆和嵌入基因的形成 recombinant D.ppt

Chapter13Content内容Somecommonterms一些常见术语self-replication 自我复制
hostcell/E.coli 宿主细胞/大肠杆菌
virus/lphage 病毒/l噬菌体
foreignDNA 外源DNA
recombinantDNA 重组DNA
cohesiveends 粘性末端
reanneal 重退火
antibioticresistancegene 抗抗菌素基因
reversetranscription 反转录
reversetranscriptase 反转录酶
encodedprotein 编码蛋白质
oligonucleotide 寡核苷酸GeneralprocedureOfDNAcloning(DNA克隆的基本过程)SomeenzymesusedinrecombinantDNATechnology重组DNA技术中常用的工具酶Vector载体Theessentialconditionsforanagenttobeacloningvectors成为克隆载体的条件Atypicalplasmidvector典型的质粒载体1977年构建成功的pBR322pBR322粘性末端,也叫cohesiveend在克隆载体中导入更多的酶切位点Directionalcloning定向克隆Thetypicalbacterialtransformationexperiment
典型的细菌转化实验λ噬菌体作为克隆载体BAC载体
BacterialArtificialChromosomesYAC载体
YeastArtificialChromosomesDNAcloning流程图利用pBR322在大肠杆菌中克隆外源DNADNAlibraries(DNA文库)Numberofclonesneeded所需克隆数ScreeningDNAlibraries（筛选DNA文库）ScreeningthegenomicDNAlibraryLabeled
DNAprobeDesignofDNAprobefromsequenceofaminoacids从氨基酸序列设计DNA探针ScreeningthecDNAlibrarycDNA文库能否构建成功的关键是高质量的mRNA的获得
一个好的cDNA文库的特征
包含有足够大量的独立克隆，代表最初的mRNA样品中的所有转录本;克隆中包含接近全长的mRNA.IsolationofeukaryoticmRNAviaolig(dT)-cellulosechromatography
通过寡聚(dT)-纤维素色谱分离真核信使RNA表达载体应有的元件大肠杆菌表达载体所需元件Atypicalexpression-cloningvector典型表达-克隆载体Atypicalexpressionvectorforthesynthesisofahybridprotein用于合成一个杂合蛋白的典型表达载体TworeporterproteinsPolymerasechainreaction(PCR)聚合酶链式反应PrinciplesofPCRConditionsrequiredforPCRApplicationofPCR(PCR的应用)PCR-basedsite-directedmutagenesis
基于PCR(技术)的点突变某些DNA顺序改变导致产生限制性片段长度多态性(RFLP)利用RFLP确定罪犯Humangenetherapy
人类基因治疗Adenovirus-mediatedgenedeliveryinvivo
逆转录病毒介导体内基因传递GeneexpressionmapstudiedbyDNAchip,SAGEtechniques用DNA芯片、SAGE等技术研究基因表达谱ＳＡＧＥ操作流程示意图转基因植物已经占据了美国50％的作物第一个转基因鼠利用大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞、乳腺等生物反应器生产的药用蛋白质Homework