CN2023112478687一种高通量测定酵母菌时序寿命的方法.pdf

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN117126913A
(43)申请公布日2023.11.28
(21)申请号202311247868.7
(22)申请日2023.09.25

(71)申请人劲牌有限公司
地址435100湖北省黄石市大冶市大冶大
道169号
(72)发明人李韦琴陈阳赖富丽徐剑
王喆周俊强唐万
(74)专利代理机构北京文苑专利代理有限公司
11516
专利代理师何新平
(51)Int.Cl.
C12Q1/02(2006.01)
G01N21/31(2006.01)

权利要求书1页说明书5页附图2页
(54)发明名称
一种高通量测定酵母菌时序寿命的方法
(57)摘要
本发明公开了一种高通量测定酵母菌时序
寿命的方法，包括：步骤一、酵母菌菌种活化及单
克隆培养；步骤二、用灭菌水10倍稀释步骤一所
得菌液，储存；步骤三、酵母菌液移入合成限定培
养基中持续培养；步骤四、取样：在SD培养基中培
养至酵母细胞达到静止期，将该时间点记为
CLS0，每隔3天取步骤三的菌液5μL移入每孔含
100μLYPD培养基的96孔板中；步骤五、利用酶
标仪绘制酵母菌生长动力学曲线；步骤六、计算

OD值为0.3时对应的时间(tOD＝0.3)。本发明具有
模型稳定性良好、实验成本低、可用于高通量检
测、节能环保的优点。
CN117126913A
CN117126913A权利要求书1/1页

1.一种高通量测定酵母菌时序寿命(CLS)的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一、酵母菌菌种活化及单克隆培养；
步骤二、酵母菌的稀释及同步化：用灭菌水10倍稀释步骤一所得菌液，并在4℃冰箱中
储存至少24h；
步骤三、酵母菌液移入SD培养基中持续培养：取步骤二菌液5μL于装有1mLSD培养基的
6.2mL试管中，用硅胶塞塞口后于30℃且转速为200rpm的水浴摇床中持续培养；
步骤四、取样：在SD培养基中培养3天以上，使酵母细胞达到静止期，将该时间点记为
CLS0，每隔3天取步骤三的菌液5μL移入每孔含100μLYPD培养基的96孔板中；
步骤五、生长动力学曲线绘制：利用酶标仪持续监测步骤四的96孔板上的酵母菌生长
24h，绘制酵母菌生长动力学曲线；
步骤六、数据处理：根据步骤五得到的生长动力学曲线原始数据，计算OD值为0.3时对

应的时间tOD＝0.3，单位为h。
2.根据权利要求1所述一种高通量测定酵母菌时序寿命(CLS)的方法，其特征在于：所
述步骤三中，取步骤二菌液5μL于装有1mLSD培养基的6.2mL试管中，SD培养基存储容器为5
～15mL规格的试管。
3.根据权利要求1所述一种高通量测定酵母菌时序寿命(CLS)的方法，其特征在于：所
述步骤三中，装有SD培养基的试管用硅胶塞塞口后于水浴摇床中持续培养。
4.根据权利要求1所述一种高通量测定酵母菌时序寿命(CLS)的方法，其特征在于：所
述步骤五中，酶标仪设置温度为30℃，检测波长为660nm或600nm，振板方式为线性振动持续
振板，每5分钟或10分钟读板一次。
5.根据权利要求1所述一种高通量测定酵母菌时序寿命(CLS)的方法，其特征在于：步
骤四中，根据酵母菌衰老情况进行调整，延长间隔的天数。
6.根据权利要求1所述一种高通量测定酵母菌时序寿命(CLS)的方法，其特征在于：所
述步骤三中，SD培养基体积不能超过试管体积的三分之一。

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CN117126913A说明书1/5页

一种高通量测定酵母菌时序寿命的方法

技术领域
[0001]本发明涉及酵母时间寿命(CLS)测定领域，具体涉及一种高通量测定酵母菌时序
寿命的方法。

背景技术
[0002]衰老是一个不可避免、不可逆转和复杂的损伤累积和功能衰退过程，增加了各种
慢性病的风险。最近，有证据表明衰老与其他常见的衰老相关疾病存在着关联。这些疾病包
括神经退行性疾病，青光眼，白内障，动脉粥样硬化等心血管疾病，糖尿病，骨关节炎，肺、肾
和肝纤维化，癌症，高血压，骨骼肌肉系统，且老龄化是慢性疾病的最大风险因素之一，包括
心血管疾病、代谢紊乱、神经退行性病变和各种恶性肿瘤，它们共同构成了全球发病率、死
亡率和健康成本的大部分。
[0003]通过建立模式生物可以促进我们对衰老相关机制的理解以及评估抗衰老药物作
用。1959年RobertK.Mortimer和JohnR.Johnston提出酵母可用作研究人类衰老的模型，
真核生物(包括人类)都拥有控制衰老的一套基因，衰老对于真核生物而言具有共通性，相
似的机制可以延长许多生物的寿命。比如，Ras/PKA营养信号通路的失活可以通过热量限制
(caloriclimit,CR)来实现，它可以延长从酵母到哺乳动物等多种真核生物的寿命；酵母
调控衰