CN2018109110679一种抗鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN108912227A
(43)申请公布日2018.11.30
(21)申请号201810911067.9

(22)申请日2018.08.10
(83)生物保藏信息
CCTCCNO：V2018432018.07.18
(71)申请人山东农业大学
地址271018山东省泰安市岱宗大街61号
(72)发明人唐熠刁有祥王鸿志
(74)专利代理机构济南誉丰专利代理事务所
(普通合伙企业)37240
代理人薛鹏喜
(51)Int.Cl.
C07K16/10(2006.01)
C07K16/02(2006.01)
A61K39/42(2006.01)
权利要求书1页说明书8页
A61P31/14(2006.01)
序列表13页
(54)发明名称
一种抗鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体及其制备
方法和应用
(57)摘要
本发明公开了一种抗鸭呼肠孤病毒的卵黄
抗体及其制备方法和应用，所述卵黄抗体是以灭
活的保藏编号为CCTCCNO：V201843的鸭呼肠孤
病毒作为抗原制备的疫苗免疫蛋鸡，然后从高免
鸡蛋蛋黄中提取纯化得到。本发明制备的卵黄抗
体的安全性好，未出现由卵黄抗体引起的任何局
部或全身不良反应；而且能够有效的预防和/或
治疗新型鸭呼肠孤病毒的感染，具有很好的商品
化开发前景。
CN108912227A
CN108912227A权利要求书1/1页

1.保藏编号为CCTCCNO：V201843的鸭呼肠孤病毒在制备预防或治疗鸭脾脏坏死的卵
黄抗体中的应用。
2.一种抗鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体，其特征在于，所述卵黄抗体是以灭活的保藏编号
为CCTCCNO：V201843的鸭呼肠孤病毒作为抗原制备的疫苗免疫蛋鸡，然后从高免鸡蛋蛋黄
中提取纯化得到。
3.权利要求2所述卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)用保藏编号为CCTCCNO：V201843的鸭呼肠孤病毒作为疫苗生产毒株，制成灭活疫
苗；
(2)用制备的灭活疫苗注射免疫产蛋鸡，制备高免蛋；
(3)由高免蛋收集卵黄，经一次灭活、酸化萃取、二次灭活、粗滤、除菌过滤、浓缩和三次
灭活后制备成防治新型鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述灭活疫苗由如下方法
制备而成：
将保藏编号为CCTCCNO：V201843的鸭呼肠孤病毒接种SPF鸡胚，收集24-120h内死亡鸡
5.0
胚尿囊液，获得病毒液；将病毒液浓缩至病毒含量≥10ELD50，浓缩后的病毒液经甲醛灭
活，加入Tween-80混合作为水相，以白油、硬脂酸铝和Span-80混合作为油相，将水相和油相
按体积比1:1混合，乳化，制得灭活疫苗。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，用制备的灭活疫苗分4次
对产蛋鸡进行免疫，每次免疫间隔2周。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述一次灭活具体为：将
卵黄液与水按体积比1:(0.5～1.5)混合，搅拌均匀后得到卵黄稀释液，于60～65℃条件下
保温25～35min。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述酸化萃取具体为：向
卵黄稀释液中加入所述卵黄稀释液体积2.5～3.5倍的醋酸盐缓冲液，搅拌后过滤收集滤
液；优选的，所述醋酸盐缓冲液的pH值为4.8-5.2；更优选为5.0。
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述二次灭活具体为：向
酸化萃取后的滤液中加入辛酸至终浓度3.5～4.5％，搅拌30-120min，搅拌后于2～8℃放置
4～8小时。
9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述浓缩具体为：利用30-
50KD的PES中空纤维超滤膜在2-8℃条件下进行浓缩，至抗体效价不低于1:512。
10.权利要求2所述的卵黄抗体在制备用于预防和/或治疗新型鸭呼肠孤病毒感染的制
品中的应用；所述新型鸭呼肠孤病毒株的保藏编号为CCTCCNO：V201843。

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CN108912227A说明书1/8页

一种抗鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体及其制备方法和应用

技术领域
[0001]本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种抗鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体及
其制备方法和应用。

背景技术
[0002]呼肠孤病毒的基因组为双股分节段的RNA，1978年国际病毒分离委员会(ICTV)将
其定为呼肠孤病毒科(Reoviridae)，包括呼肠孤病毒属、环状病毒属和轮状病毒属。呼肠孤
病毒(Avianreovirus)首次在鸡的呼吸道内分离得到，感染易感鸡后，可表现为肌腱炎、滑
膜炎和呼吸道疾病等症状。ARV可感染鸡、火鸡、鸭、鹅、鹦鹉、鸽子等禽类，可引起鸡