2022111289109一种桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法.pdf

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN115386532A
(43)申请公布日2022.11.25
(21)申请号202211128910.9
(22)申请日2022.09.16
(71)申请人西北农林科技大学
地址712100陕西省咸阳市杨凌示范区邰
城路3号
(72)发明人赵彩平刘福云康同洋武海霞
徐泽胡亚楠徐玉婷张永兰
(74)专利代理机构西安长和专利代理有限公司
61227
专利代理师黄伟洪
(51)Int.Cl.
C12N5/04(2006.01)
C12N15/84(2006.01)

权利要求书2页说明书9页附图8页
(54)发明名称
一种桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化
的方法
(57)摘要
本发明属于植物组织培养技术领域，公开了
一种桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方
法，将采集到的桃果实样品进行消毒灭菌处理，
取果肉接种到诱导培养基上避光培养后，再转入
继代培养基中进行继代培养；使用携带目的基因
载体的GV3101农杆菌侵染桃果肉愈伤组织；将愈
伤组织接种到共培养基上，三天后接种到筛选培
养基上筛选培养，筛选三代后取样检测。本发明
成功实现了甜桃王果肉愈伤组织的诱导继代和
侵染过程的优化，克服了桃缺少稳定高效的遗传
转化体系的技术壁垒。同时，本发明的方法操作
简便，转化效率高，为桃分子生物学研究，尤其是
桃果肉相关基因的分析提供了一种新的试验材
料，同时为其他品种桃愈伤组织的培养提供了参
考和借鉴。
CN115386532A
CN115386532A权利要求书1/2页

1.一种桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法，其特征在于，所述桃果肉愈伤组
织诱导继代及遗传转化的方法包括：
将采集到的桃果实样品进行消毒灭菌处理，取果肉接种到诱导培养基上避光培养后，
再转入继代培养基中进行继代培养；使用携带目的基因载体的GV3101农杆菌侵染桃果肉愈
伤组织；将愈伤组织接种到共培养基上，三天后接种到筛选培养基上筛选培养，筛选三代后
取样检测。
2.如权利要求1所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法，其特征在于，所述桃
果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法包括以下步骤：
步骤一，将采集到的桃果实样品进行消毒灭菌处理；
步骤二，取果肉切片接种到诱导培养基上避光培养，得到愈伤组织后切下转入继代培
养基中进行继代培养；
步骤三，将含有目的载体的GV3101农杆菌使用侵染液悬浮后进行侵染，选择继代生长
25天的果肉愈伤组织，再接种到共培养基上；
步骤四，将果肉愈伤组织接种到共培养基上培养三天后，再接种到筛选培养基上进行
筛选培养，筛选三代后取样检测。
3.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法，其特征在于，所述步
骤一中的桃果实样品选自甜桃王、浅间白桃X保加利亚或秦光X艳光中的任意一种，优选为
甜桃王；
所述桃果实取样时期为花后20～60天，优选花后20～27天的果实取样。
4.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法，其特征在于，所述步
骤二中使用的基础培养基为1/2MS、MS、SH或WPM培养基中的任意一种，优选为SH培养基；其
中，所述SH培养基包括13.21g/LSH、7.5g琼脂和30g蔗糖。
5.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法，其特征在于，所述步
骤二中的桃果肉样品的切片形状为圈状或片状，优选为圈状果肉。
6.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法，其特征在于，所述步
骤二中的诱导培养基的组成为1～2mg/L2,4‑D+0～1mg/LTDZ；
所述诱导培养基中添加有生长调节剂，所述生长调节剂选自2.0mg/L2,4‑D、1.0mg/
L2,4‑D+1.0mg/LTDZ或0.5mg/LIBA+1.mg/LTDZ中的任意一种，优选为1.0mg/L2,4‑D+
1.0mg/LTDZ诱导愈伤组织。
7.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法，其特征在于，所述步
骤二中的继代过程中的培养器皿为玻璃组培瓶或一次性塑料培养皿，优选为玻璃组培瓶进
行愈伤组织的继代增殖；
所述继代培养基中添加有植物生长调节剂，不同植物生长调节剂的配比为0.5mg/L2,
4‑D+0.5mg/LTDZ，1.5mg/L2,4‑D+1.5mg/L6‑BA或1.5mg/L2,4‑D+1.5mg/LZT，优选为
0.5mg/L2,4‑D+0.5mg/LTDZ；

所述继代培养基中添加有防褐化物质，所述防褐化物质为0.5mg/LAgNO3，1～3g/LPVP或
10～30mg/LVC。
8.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法，其特征在于，所述步
骤三中的侵染时间为愈伤继代培养生长25～35天，所述侵染液为13.2