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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115386532A(43)申请公布日2022.11.25(21)申请号202211128910.9(22)申请日2022.09.16(71)申请人西北农林科技大学地址712100陕西省咸阳市杨凌示范区邰城路3号(72)发明人赵彩平刘福云康同洋武海霞徐泽胡亚楠徐玉婷张永兰(74)专利代理机构西安长和专利代理有限公司61227专利代理师黄伟洪(51)Int.Cl.C12N5/04(2006.01)C12N15/84(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图8页(54)发明名称一种桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法(57)摘要本发明属于植物组织培养技术领域,公开了一种桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法,将采集到的桃果实样品进行消毒灭菌处理,取果肉接种到诱导培养基上避光培养后,再转入继代培养基中进行继代培养;使用携带目的基因载体的GV3101农杆菌侵染桃果肉愈伤组织;将愈伤组织接种到共培养基上,三天后接种到筛选培养基上筛选培养,筛选三代后取样检测。本发明成功实现了甜桃王果肉愈伤组织的诱导继代和侵染过程的优化,克服了桃缺少稳定高效的遗传转化体系的技术壁垒。同时,本发明的方法操作简便,转化效率高,为桃分子生物学研究,尤其是桃果肉相关基因的分析提供了一种新的试验材料,同时为其他品种桃愈伤组织的培养提供了参考和借鉴。CN115386532ACN115386532A权利要求书1/2页1.一种桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法,其特征在于,所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法包括:将采集到的桃果实样品进行消毒灭菌处理,取果肉接种到诱导培养基上避光培养后,再转入继代培养基中进行继代培养;使用携带目的基因载体的GV3101农杆菌侵染桃果肉愈伤组织;将愈伤组织接种到共培养基上,三天后接种到筛选培养基上筛选培养,筛选三代后取样检测。2.如权利要求1所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法,其特征在于,所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法包括以下步骤:步骤一,将采集到的桃果实样品进行消毒灭菌处理;步骤二,取果肉切片接种到诱导培养基上避光培养,得到愈伤组织后切下转入继代培养基中进行继代培养;步骤三,将含有目的载体的GV3101农杆菌使用侵染液悬浮后进行侵染,选择继代生长25天的果肉愈伤组织,再接种到共培养基上;步骤四,将果肉愈伤组织接种到共培养基上培养三天后,再接种到筛选培养基上进行筛选培养,筛选三代后取样检测。3.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法,其特征在于,所述步骤一中的桃果实样品选自甜桃王、浅间白桃X保加利亚或秦光X艳光中的任意一种,优选为甜桃王;所述桃果实取样时期为花后20~60天,优选花后20~27天的果实取样。4.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法,其特征在于,所述步骤二中使用的基础培养基为1/2MS、MS、SH或WPM培养基中的任意一种,优选为SH培养基;其中,所述SH培养基包括13.21g/LSH、7.5g琼脂和30g蔗糖。5.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法,其特征在于,所述步骤二中的桃果肉样品的切片形状为圈状或片状,优选为圈状果肉。6.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法,其特征在于,所述步骤二中的诱导培养基的组成为1~2mg/L2,4‑D+0~1mg/LTDZ;所述诱导培养基中添加有生长调节剂,所述生长调节剂选自2.0mg/L2,4‑D、1.0mg/L2,4‑D+1.0mg/LTDZ或0.5mg/LIBA+1.mg/LTDZ中的任意一种,优选为1.0mg/L2,4‑D+1.0mg/LTDZ诱导愈伤组织。7.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法,其特征在于,所述步骤二中的继代过程中的培养器皿为玻璃组培瓶或一次性塑料培养皿,优选为玻璃组培瓶进行愈伤组织的继代增殖;所述继代培养基中添加有植物生长调节剂,不同植物生长调节剂的配比为0.5mg/L2,4‑D+0.5mg/LTDZ,1.5mg/L2,4‑D+1.5mg/L6‑BA或1.5mg/L2,4‑D+1.5mg/LZT,优选为0.5mg/L2,4‑D+0.5mg/LTDZ;所述继代培养基中添加有防褐化物质,所述防褐化物质为0.5mg/LAgNO3,1~3g/LPVP或10~30mg/LVC。8.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及遗传转化的方法,其特征在于,所述步骤三中的侵染时间为愈伤继代培养生长25~35天,所述侵染液为13.21g/LSH培养基、20g/2CN115386532A权利要求书2/2页L蔗糖、100mmol/LAS和3%Silwet77。9.如权利要求2所述桃果肉愈伤组织诱导继代及