实时荧光定量PCR——TaqMan探针法及设计原则.ppt
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实时荧光定量PCR——TaqMan探针法及设计原则.ppt
实时荧光定量PCR——TaqMan探针法序列选取应在基因的保守区段;避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对,避免引物自身形成环状发卡结构;典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长,保证序列独特性,并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。Tm值在55-65℃,GC含量在40%-60%;引物之间的TM相差避免超过2℃;引物的3’端避免使用碱基A,引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基;为避免基因组的扩增,引物设计最好能跨两个外显子;Taqman探针技术要求片段长度在50bp-150b
实时荧光定量PCR仪参数.doc
(完整word版)实时荧光定量PCR仪参数(完整word版)实时荧光定量PCR仪参数(完整word版)实时荧光定量PCR仪参数ADDINCNKISM.UserStyle实时荧光定量PCR仪参数仪器性能检测模式:HybProbe杂交探针、SimplProbe单探针、染料模式、水解探针、分子信标、蝎型探针、高分辨率熔解曲线(HRM)等线性范围:1—1010个拷贝检测灵敏度:可检测单拷贝基因模块规格:支持96孔模块与384孔模块★模块互换:用户可自行更换并升级至384模块,自行手动更换后无需校准重复性:样
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实时荧光定量PCR的原理及实验.doc
实时荧光定量PCR的原理及实验2————————————————————————————————作者:————————————————————————————————日期:个人收集整理勿做商业用途个人收集整理勿做商业用途12个人收集整理勿做商业用途实时荧光定量PCR的原理及实验无论是对遗传病(如地中海贫血和血友病)、传染病(如肝炎和艾滋病)或肿瘤进行基因诊断,还是研究药物对基因表达水平的影响,或者监控药物和疗法的治疗效果,定量pcr技术都可以发挥很大作用。定量pcr技术的最新进展是实时荧光定量。该技术借助
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实时荧光定量PCR方法简介实时荧光定量PCR的基本原理理论上,PCR过程是按照2n(n代表PCR循环的次数)指数的方式进行模板的扩增。但在实际的PCR反应过程中,随着反应的进行由于体系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰减)使得靶序列并非按指数方式扩增,而是按线性的方式增长进入平台期。因此在起始模板量与终点的荧光信号强度间没有可靠的相关性。如采用常规的终点检测法(利用EB染色来判断扩增产物的多少,从而间接的判断起始拷贝量),即使起始模板量相同经PCR扩增、EB染色后也完全有可能得到不同的终点荧光信号强