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天然药物活性筛选中心筛选模型.pdf

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天然药物活性筛选中心筛选模型 抗肿瘤（抗炎）药物活性筛选 体外肿瘤细胞毒筛选模型 活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTS，生成蓝紫色产物，颜色 与活细胞数目以及细胞活力成正比。该方法是细胞活性检测的经典方法，广泛应 用于检测细胞增殖和抑制、化合物或者精制组分的体外肿瘤细胞毒性、化合物对 受试细胞的半数生长抑制浓度IC50值的确定、化合物对受试细胞的抑制效应与 剂量相关性以及化合物对肿瘤细胞与非肿瘤细胞的选择性毒性测定等。 该模型可用于评价化合物对体外肿瘤细胞生长及增殖的抑制活性，也可用 来指导精制组分中的抗肿瘤活性单体的追踪分离，检测结果准确，重复性好，可 高通量进行。 体内抗肿瘤药效评价模型（裸鼠移植瘤） 采用移植人肿瘤的免疫缺陷小鼠为模型，对于体外筛选中获得的具有抗肿瘤 活性的药物进行体内活性评价。该模型广泛应用于抗肿瘤药物研发，是抗肿瘤药 物研发中的重要环节，结果综合反映药物的体内作用效果，为评价化合物的成药 性提供重要的数据。 一氧化氮（NO）生成抑制剂筛选 一氧化氮（nitricoxide,NO）具有广泛而重要生物学调控功能，在炎症、 肿瘤及心血管系统等均有重要作用。当免疫细胞遭受微生物内毒素、炎症介质等 刺激时，会生成大量的诱导型一氧化氮合成酶（inducedNOsynthase，iNOS）， 生成NO进行免疫应答，因此抑制NO生成是化合物抗炎活性的直接指标。 NO的含量测定间接反映iNOS的表达水平或酶活性水平，而编码iNOS的 基因是NF-κB信号通路的直接靶基因，因此该检测结果也是评价化合物激活 NF-κB信号通路活性的重要指标。NF-κB信号通路与肿瘤及其他疾病发生密 切相关，因此该模型检测结果对化合物抗肿瘤、心血管以及神经系统等的活性具 有重要的提示作用。 该模型直接评价化合物抑制NO生成的活性，适合通量筛选，快速，灵敏。 可通过预刺激确证化合物是否作用于NF-κB信号通路，为进一步作用机制的研 究提供线索。 NF-κB信号通路抑制剂筛选 核转录因子NF-κB通过调控多种基因的表达，参与免疫反应、炎症反应、 细胞凋亡、肿瘤发生与转移等多种生理过程。细胞中的NF-κB与抑制性蛋白I κBα结合形成复合物，并被滞留于细胞质而处于非活化状态，当细胞受到各种 胞内外刺激时，IκBα被迅速地降解，NF-κB得以释放并进入细胞核，调控与 细胞周期和凋亡密切相关的系列靶基因的表达。在多种肿瘤的发生发展中均发现 NF-κB信号通路的异常激活，因此该信号通路的抑制剂具有重要的抗肿瘤药物 成药前景。 该模型应用双荧光素酶报告基因系统直接检测化合物对NF-κB信号通路 的抑制作用，方法直接、灵敏，检测结果是化合物是否作用于信号通路的直接判 断依据。 wnt信号通路抑制剂筛选 wnt/β-catenin信号通路通过调控细胞周期，增殖和分化密切相关的基因 （如cyclinD1,C-Myc等）表达，在早期胚胎发育，成体细胞增殖以及干细胞的自 我更新过程中行驶着重要的调控功能，该信号通路的异常激活与肿瘤的发生发展 直接相关，是重要的抗肿瘤药物潜在靶点。规模化筛选抑制wnt信号通路的小分 子化合物是目前国内外肿瘤药物研发领域的热点，wnt信号通路抑制剂具有重要 的抗肿瘤药物成药前景。 该模型应用双荧光素酶报告基因系统直接检测化合物对wnt/β-catenin 信号通路的抑制作用，检测快速，灵敏度高，可高通量进行。 蛋白酶体抑制剂筛选模型 蛋白酶体是一种高度保守的多价催化蛋白酶复合物，广泛存在于真核细胞的 核内和细胞质内。这种复合物能催化水解连接有多聚泛素链的蛋白，是泛素-蛋 白酶体通路的主要组分，作为体内蛋白质降解的途径之一，控制着细胞的分化、 生长、凋亡等过程具有非常重要的生理作用，与肿瘤发生发展密切相关，抑制蛋 白酶体的功能是肿瘤治疗的重要靶点，目前已发现通过抑制蛋白酶体对肿瘤有明 显疗效的药物，如硼替佐米已批准用于治疗耐药的多发性骨髓瘤患。 该模型针对蛋白酶体复合物的核心20S催化颗粒进行筛选，可直接评价化 合物对蛋白酶体的抑制活性，检测靶点明确，快速，灵敏度高。 IκB激酶-β(IKK-β)抑制剂筛选模型 NF-κB信号转导途径与炎症和肿瘤的发生、发展密切相关。IκB激酶(IKK) 是该信号通路转导过程中的重要蛋白。当细胞受到胞外信号刺激时，IκBα激 酶(IKK)被激活，使IκBαN端丝氨酸残基发生磷酸化，并在蛋白酶体的作用下 被识别并降解。从IκBα释放出来的NF-κB迅速从胞浆转移到细胞核，激活 相应靶基因表达，从而调控炎症肿瘤等疾病的发生发展。IKK-β抑制剂的研究对 于抗炎抗肿瘤新药的开发具有重要意义，是抗炎抗肿瘤药物的重要潜在靶点。 该模型直接检