第章食品微生物检验的基本程序.ppt

第四章食品微生物检验的基本程序第一节微生物学检验实验室的规则及注意事项一、微生物学及微生物学检验实验室的规则（6）进入实验室要保持安静，禁止高声谈活，不准打闹嘻笑。
（7）必须按照指定的方法，小心地处理传染性材料、培养物和污染的物质，要正确地使用存放污染器材的各种消毒容器。
（8）接种环使用前后必须进行烧灼灭菌。
（9）必须小心地避免任何有菌材料的溅出，若不慎污染了工作台、手、眼、衣服和地面等处，应立即报告老师，以便及时作适当处理。
（10）培养物和传染性材料须放在工作台的安全部位，尽可能保持台面的清洁整齐。
（11）爱护公物，合理使用实验材料和器材，如不慎损坏了某些器具，应及时报告老师，听候处理。
（12）实验完毕后清理台面，将需培养的标本及时放入培养箱。关闭水、电、煤气和门窗后离开实验室。二、实验室意外的紧急处理办法第二节微生物检测实验室的设施一、微生物检测实验室的设施与设备二、洁净室(无菌室)1、我国GMP（goodmanufacturingpractice，良好操作规范）实施指南提出的洁净室(无菌室)级别2、2010年版GMP（goodmanufacturingpractice，良好操作规范）实施指南提出的洁净室(无菌室)级别3、洁净室(无菌室)的使用管理要求无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18~26℃，相对湿度45％~65％。缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室(区)与室外大气的静压差大于10Pa。无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。缓冲间和操作间所设置的紫外线杀菌灯(2~2.5W／m3)应定期检查辐射强度，要求在操作面上达40μW／cm2。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。（2）建立使用登记制度SOP内容至少要有以下几点：
1）规定净化系统的运转时间要求：每次实验前应开启净化系统使运转至少1h以上，同时开启净化台和紫外灯。
2）物品进入洁净室(无菌室)基本要求：凡进人洁净室(无菌室)的物品，必须先在第一缓冲间内，对外部表面用消毒剂消毒灭菌，再经物流缓冲间、传递窗1h以上，及无菌空气吹干后送入无菌室。注意带纤维、易发尘物品不得带进净化实验室。无菌室内固定物品不得任意搬出。3）人员进入洁净室(无菌室)要求：实验人员进入洁净室(无菌室)不得化妆、带手表、戒指等首饰；不得吃东西、嚼口香糖。应清洁手后进入第一缓冲间更衣，同时换上消毒隔离拖鞋，脱去外衣，用消毒液消毒双手后戴上无菌手套，换上无菌连衣帽(不得让头发、衣等暴露在外面)，戴上无菌口罩。然后，换上或再戴上第二副无菌手套，在进入第二缓冲间时换第二双消毒隔离拖鞋。再经风淋室30s风淋后进入无菌室。4）温湿度观察要求：观察温度计、湿度计上显示的温湿度是否在规定的范围内，并作为实验原始数据己录在案。如发现问题应及时寻找原因，及时报修和及时报告实验室主管，并将报修原因和结果记录归档。
5）沉降菌落计数与浮游菌测定要求：在每次实验同时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。每周1次，或在无菌检查等必要时，在每次实验同时对操作室和净化台进行浮游菌测定，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。6）消毒要求：无菌室每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液或其他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。
方法：用无菌纱布浸渍消毒溶液清洁超净台的整个内表面、顶面以及无菌室、人流、物流、缓冲间的地板、传递窗、门把手。
消毒程序：应从内向外，从高洁净区到低洁净区，逐步向外退出洁净区域。然后开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1~2h，以杀灭存留微生物。在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌30min。常用消毒剂的品种有：5~20倍稀释的碘伏水溶液、0.1％新洁尔灭溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3％碘酒溶液、5%石炭酸(来苏儿）消毒溶液、2％戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液等。

所用的消毒剂品种与使用要进行有效性验证方可使用，并定期更换消毒剂的品种。

尼泊金乙醇消毒液处方：对羟基苯甲酸甲酯21.5g，对羟基苯甲酸丙酯8.6g，75％乙醇10.0ml。

7）其他要求：如遇停电，应立即停止实验，离开无菌室。关闭所有电闸。重新进入无菌室前至少开启机房运转1h以上。（4）洁净度检查的要求与方法2）浮游菌检测方法及标准：用专门的采样器，宜采用撞击法机制的采样器。一般采用狭缝式或离心式采样器，并配有流量计和定时器，严格按仪器说明书的要求操作并定时校检，采样器和培养