全外显子组测序技术及其在肿瘤研究中的应用.pdf

··中国肿瘤外科杂志年月第卷第期，，，
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综述
全外显子组测序技术及其在肿瘤研究中
的应用

陈怡然，吴小华
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作者单位：上海，复旦大学附属肿瘤医院妇瘤科
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第一作者：陈怡然，女，复旦大学上海医学院临床医学八年制临床博士研究生，：
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通讯作者：吴小华，男，教授，主任医师，博士研究生导师，研究领域：妇科恶性肿瘤手术及综合治疗与转化型研究

【摘要】全外显子组测序作为新兴技术，相比于全基因组测序，其低成本、高效率的优势使得其在
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疾病机制的研究中有相当的应用前景。肿瘤作为多基因复杂疾病，其致病机制，分型、治疗、预后、干细
胞特性等均可能与外显子组的变异存在一定关系。全外显子组测序技术可为肿瘤相关性研究提供新思
路。本文对全外显子组测序的技术路线及其在肿瘤学研究中的应用进行综述。
【关键词】外显子；测序；肿瘤
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文章编号：（）
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随着年人类基因组计划的完成，以及其他全外显子组序列捕获
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种类生物全基因组图谱的陆续描绘，发现不同种群以两种较成熟的方法为例。
间的基因差别仅为，主要表现为外显子的差异。外显子序列捕获芯片法基因
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外显子作为蛋白质的编码区，是中的重要功能组被随机打断成片段，随后在片段两端
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序列，其仅占人类基因组约员，但涵盖了与个体分别连上接头，与定制的序列捕获芯片杂交，去除未
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表型相关的大部分功能性变异，与人类约的导与芯片结合的背景，将经过富集的外显子区域
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致疾病的基因突变相关圆。全外显子组（）为的洗脱并扩增。
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人类基因组全部外显子区域的总称，全外显子组测捕获法所要求的基因起始量
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序（）又称为定向外显子组捕低，能有效地捕获包含未知突变的。具体步
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获（），可选择性的对人类基因骤缘：（）基因组被打断，并组装成测序平台
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组的编码区进行测序，从而发现罕见及常见疾病相特异的文库形式。在捕获之前，对文库的大小进行
［］
关的异常基因猿。目前，全外显子组测序相比于全选择，并利用电泳等方法来进行验证。（）精选大
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基因组测序，其低成本、高效率的优势日益显著。在小的文库，随后与诱饵共同孵育。（）加入链
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单基因疾病的应用中，其不仅加快单基因缺陷疾病酶亲和素标记的磁珠，并通过强磁铁从混合物中钓
的基因确定，在系统地预测疾病相关基因方面亦有出诱饵杂合体。（）洗脱磁珠，将
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应用。对于复杂疾病如肿瘤、糖尿病等的致病基因诱饵降解，将得到的目的进行常规的扩增和
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和易感基因的测定等源也有相当的应用前景。本测序。
文主要对全外显子组测序技术以及目前该技术在肿以上方法主要通过捕获芯片或溶液型目标富集
瘤研究中的应用等问题进行阐述。系统完成。捕获芯片作为定向测序的快速有效的方
法，更适用于小型化研究，而溶液型则适用于样品数
员摇全外显子组测序技术
量上千的大规模高通量测序研究。
全外显子组测序技术作为一种新型的基因组分全外显子组测序
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析技术，包括全外显子组序列捕获及测序。目前应用的主要测序平台有：，
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万方数据
中国肿瘤外科杂志年月第卷第期，，，··
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Ⅱ，。各位置的颜色信息，从而推断出相应的碱基
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序列苑。
Ⅱ即合成测序
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法，采用Ⅱ系统。单链的片段两端通过接
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通固定到芯片表面，形成桥结构，之后以寡核苷酸为
引物进行扩增，得到单克隆族群。测序
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中，利用“可逆终止子”，使得每个测序循环只掺入
单个碱基，获得各位置单个碱基的信息后，将反应试
［］
剂洗脱，加入新的反应体系，开始下一测序循环愿。
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新一代的测序平台，与传统测序技术相比，利用
接头构建基因文库，在反应基质上进行大规模的并
行，实现了边合成边测序的可能性。
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不可否认的是，全外显子测序技术作为一种新
ÔÓ½»型技术，目前其对于全基因