稗草致病菌――尖角突脐孢菌菌株RAPD指纹图谱的分析.pdf

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稗草致病菌———尖角突脐孢菌菌株!"#$指纹图谱的分析

陈勇0倪汉文#"

（0解放军军需大学农副业生产系长春0"$$7#）
（#中国农业大学农学与生物技术学院农药与植物检疫系北京0$$$3!）

摘要：以我国主要稻区的稗草植株上分离的04株尖角突脐孢菌菌株为试验材料，采用改良
的GHG法提取其基因组H/*，并运用优化的I*JH分析体系对其进行了分子标记遗传差异研
究。从#2个随机引物中筛选出#$个扩增效果好的引物，对全部试验材料进行了I*JH扩增，
共得到#"3条有效带，其中多态性带##3条（占32)%K）。依据扩增结果建立了04株尖角突脐
孢菌基因型的H/*指纹图谱并对其进行了有效区分。根据I*JH分析结果计算了菌株间的
遗传距离，分析了它们的遗传差异并进行了聚类分析，结果表明，I*JH分子标记技术是能够
用于杂草致病菌资源的鉴定的，并可以进一步应用于特定性状的基因标记研究。
关键词：尖角突脐孢菌，I*JH分析，指纹图谱，遗传差异，菌株鉴定
中图分类号：L3"3E7!文献标识码：*文章编号：$$$087#$3（#$$"）$!8$!$38$%

稗［!"#$%&"#’&(")*+8,(’’$（M)）16:+N)］是世界十大恶性杂草之一，为水稻田危害最严
重的杂草。与水稻的伴生性强，极难清除，亦发生于潮湿旱地，危害棉花、大豆等秋熟旱作
物。目前主要采用化学防除稗草。利用真菌除草剂防治稗草将是一条有效的新途径。经
［］
研究发现尖角突脐胞菌（!-+.)&#$’*//&%&".)(+）具有作为防除稗草的潜力0O"。
真菌，是一种遗传多样性很丰富的生物种群，不同生态型、不同地域、以及不同时期分
离的真菌，它们的遗传特性表现不同，而且种内变异很大，使得真菌在形态分类鉴定上十
分困难。对真菌菌种种下的分类鉴定，可采用传统的形态学、生理生化特性、免疫学和同
工酶等手段［!］；通过病理学手段，研究其专化型，分离鉴别出专化型毒素［2］。在菌种内菌
株间分类鉴定需要极其专业的技术人员，而且很难做到简单快速，至今尚无一个通用、高
效、简便的鉴定方法。
［］
近年来分子生物学技术的不断发展和完善，H/*指纹图谱应运而生7，把种质资源
的研究提高到一个新水平。其中H/*随机扩增产物多态性（I:@D’=*=P(>Q>6DJ’(F=’RP?>C
H/*，简称I*JH）分子标记技术，已成为近年来发展最快、应用最广的一种标记技术。提
出后短短几年中已广泛应用于连锁标记检测主基因、建立遗传图谱、确定染色体的同源发
生、基因的染色体定位、图谱分析以及分类、杂种和品种的鉴定等方面［7］。这些技术很快
应用到微生物分类鉴定上［4］，但是应用于真菌除草研究还不多［%］。目前这方面的研究很

基金项目：国家“十五”攻关项目（#$$01*2$31$4）
"通讯作者。56(：%780$87#%30"$#；9:;：%780$87#%30$22；<8=:>(：?:@A6@@>BC:+)6D+)C@
作者简介：陈勇（0373E），男，江西石城人，讲师，博士，主要从事微生物除草剂研究。<8=:>(：C?F,,BF:?’’)C’=
收稿日期：#$$#80$8#0，修回日期：#$$"8$"8#4
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薄弱，亟待进一步加强研究和解决。分子生物学技术作为一种功能强大的实验手段，如广
泛应用于微生物除草剂的菌种改良、生物测定及环境风险评价等方面，将会极大地加快微
生物除草剂的研发速度，更多的微生物除草剂产品服务于人类。本试验试图通过研究建
立一种简单、快捷、自动化程度高的方法以鉴定稗草致病真菌菌种资源。

!材料和方法

!"!菌株
试验材料为尖角突脐孢菌真菌，分离自吉林、黑龙江、北京、湖北、江西、广东、贵州、山
东、江苏等地采集稗草具病斑的叶片上。试验用的!"个菌株为：#$、%&’、%("、!)、*$"、
+,$、-.#、+*$、!/、%0!、+*.、12、0!’、3!、+,#、+*’!和4’，各菌株在马铃薯葡萄糖培养液
+%,中，$)5下振荡培养"6，使之长成菌丝团，分别取各菌株的菌丝用于提取基因组
%47。
!"#试剂和仪器
气热式+8(扩增仪：型号是9%:%8;<$-$$<，英国9=>?@6公司生产，购自生命科学
国际集团。
A@B!<碱基随机引物：其中$<个引物购自上海生工生物工程技术服务有限公司，序列
号为-<!C-$<；另外’个引物使用美国DEFGHI公司生产的，购自中国科学院遗传研究所，
序列号为HEE<!CHEE<’。