一株产黄酮银杏内生真菌的分离鉴定与培养介质的初步研究.pdf

第!+卷第)期南京师大学报（自然科学版）MUG%!+4U%)
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一株产黄酮银杏内生真菌的分离鉴定与
培养介质的初步研究

王梅霞，陈双林，闫淑珍，霍娟

（南京师范大学生命科学学院，!)""*,，南京）

［摘要］从银杏（!"#$%&’"(&’)*%）叶片中分离获得了一株内生真菌./0，经形态分类学研究鉴定为刺盘孢
+&((,-&-."/01234%用123分析培养液发现该菌可产生黄酮类化合物%培养生物学特性的研究表明不同的碳、氮源
对其生长和代谢有不同的影响，蔗糖和葡萄糖、6，能够明显促进其生长；乳糖、8能够明显促进其酮类物
45047!
质的合成%
［关键词］银杏，内生真菌，黄酮类化合物，分离，鉴定，培养

［中图分类号］9*0*%-!，9*-+，［文献标识码］:，［文章编号］)"")!0+)（+!""-）")!")"+!"$

!引言
内生真菌一般是指在其生活史中某一段时期生活在活的植物组织内，并且不引起明显病
［］
害症状的真菌)%近十几年的研究表明内生真菌对植物某些活性成分的形成有重要影响，通常
会产生与其宿主植物相同或相似的生理活性物质［!，-］，在红豆杉、长春花、龙血树、雷公藤等植
［—］
物中都获得了内生真菌0*，它们能够产生这些植物所含有的药用活性成分%本研究证实了银
杏中亦存在有内生真菌，发现了可产生银杏主要药用活性成分之一的银杏黄酮类化合物的一
个菌株，对该菌的鉴定和培养特性的初步研究为通过内生真菌发酵生产银杏黄酮奠定了基础%
"材料和方法

"%"菌种
银杏内生真菌菌种由作者通过常规组织分离法自采于江苏省启东市的新鲜银杏叶片中获
得%
"%#液体培养
制备马铃薯葡萄糖培养液，于!$";2三角瓶中装液)"";2%用接种针挑取少许菌丝接种%
!#<、)""=>;?@下培养+A，滤去菌丝，培养液于旋转蒸发仪中0"<减压浓缩得棕色粘稠物%加
入*$B乙醇，#"""CD高速离心$;?@，除去沉淀，上清液用乙醇定容备用%
"%$%&’分析
用硅胶/（青岛海洋化工厂生产，化学纯）自制成硅胶薄板%银杏黄酮对照品由中国药科大
学提供展开剂：（）氯仿：甲醇；（）甲苯：甲酸乙酯：甲酸；显色剂：
%"E+F)#E$F0F)-B:G3G-

收稿日期：!""!!"#!"$%
基金项目：江苏省教育厅自然科学基金项目（"!&’()#"""!）；南京师范大学引进人才启动基金项目（!)))""(*"+）%
作者简介：王梅霞，)*,+—，南京师范大学生命科学学院硕士研究生，主要从事内生真菌的研究%
通讯联系人：陈双林，)*+-—，南京师范大学生命科学学院教授，硕士生导师，主要从事真菌研究%
万方数据
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王梅霞，等：一株产黄酮银杏内生真菌的分离鉴定与培养介质的初步研究
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乙醇溶液!
!!"内生真菌的生长速率和生长量测定
分别配制以下种类的固体和液体培养基：马铃薯葡萄糖培养基、马丁氏培养基、查氏培养
基、银杏组织浸汁培养基、玉米粉培养基和燕麦片培养基!取等量菌丝体圆片分别接种在固体
平板和培养液中，"#$温箱中培养!从接种后第%&起测量平板上菌落直径，每隔"’(测量)
次!液体培养于接种后每*&开始过滤烘干称量，测菌丝生长量，每’&测)次，每个处理设%次
重复!
!!#碳源、氮源对内生真菌生长与代谢产黄酮的影响
培养基为半组合培养基!分别以豆芽汁培养基和玉米粉培养基为基本培养基，外加碳源有
葡萄糖、淀粉、糊精、蔗糖和乳糖，氮源有（）、、、尿素取等量活化后的菌种
+,’"-.’+/+."0+.%!
分别接种到以上述碳、氮源为唯一碳、氮源的液体培养基中，于"#$，)1123456下培养7"(后，
测菌丝的生长量!将不同碳、氮源的培养液减压浓缩，用分光光度法测定其黄酮化合物的含量!
$结果

$!!银杏内生真菌89’的形态特征
从银杏组织中共分离得到%%株真菌，自菌株89’的培养液中明显检测到有黄酮类物质，
故选择该菌株为本研究供试菌!在马铃薯葡萄糖培养基平板上该菌菌丝体白色，显微镜下菌丝
纤细、分枝、有隔、近于无色透明，老熟菌丝带浅黄褐色，间生有厚垣孢子（图)、"）!菌落上常生
粉红色油滴状粘性物，显微镜下显示为孢子团!后期，菌落上轮生黑色点状物，镜下显示为分生
孢子盘，碟盘状，直径；内生刚毛，刚毛暗褐色，具分隔，表面光滑，至顶端渐尖，长
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；分生孢子梗浅褐色，有隔，长，宽（图）；全壁