白酒中酯类的测定.doc

反相液相色谱测定白酒中多种香味物质

前言：
白酒是含香味物质的高浓度酒精水溶液，其主要成分乙醇、水总量约占到
98%-99%以上，而其余的微量成分则占不到2%，但是这2%的微量成分是构成不同白酒香味特征的决定性因素。白酒中微量香味成分繁多，各种微量成分呈香呈味强度的不同以及在他们白酒中含量和相互比例的不同，构成了不同香型和不同风格的中国白酒,全国五大香型白酒，即酱香型、清香型、浓香型、米香型和其他香型白酒。展为芝麻香型白酒、兼香型白酒、凤香型白酒、豉香型白酒和特香型白酒5种，与前面提到的五大类型并称为全国白酒十大香型。白酒中微量成分种类大概有成百上千种，其中乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯、丙酸乙酯、戊酸乙酯、辛酸乙酯、二元酸（庚/辛/壬）二乙酯、β-苯乙醇、3-甲硫基丙醇、三/四甲基吡嗪、糠醛、乙缩醛等十几种成分是白酒香味的常见重要组成，也是各厂家质量控制检测的关键成分。每种香型的中国白酒都有其特征性的香味成分，比如，β-苯乙醇是豉香型和米香型的特征性成分，酱香型茅台酒糠醛含量高，芝麻香型酒的特征性成分是3-甲硫基丙醇，三甲基吡嗪、四甲基吡嗪在凤香型白酒和酱香型茅台中含量较高。
白酒工艺精良，组成复杂，风味独特，准确测定白酒中香味组分的含量是白酒质量控制分析的关键。目前对白酒的质量控制和成分的分析检验中，主要依靠气相色谱法、液相色谱法等方法。但是，白酒中香味组分性质各异，很难用一种分析方法准确地分析多种不同类别的香味成分，所以要根据具体的被测物质选择合适的分析方法。本文建立了HPLC-UV同时测定白酒中的5种香味化合物的方法，结果准确可靠，对监控白酒行业质量及安全管理具有重要的实意义。
实验方法：
仪器与试剂
仪器
高效液相色谱仪配有紫外可见分光检测器（LC-20A，岛津，日本）
固相萃取装置（24口，SUPELCO，美国）
固相萃取小柱（OasisHLB6cc，Waters，美国）
数控超声波清洗器
移液枪（5000μL、1000μL、200μL、20μL，Eppendorf，德国）
旋涡混合器（MVS-1，北京金北德工贸有限公司，中国）
天平1（ME2355，Max=230g，d=0.01mg，德国）
天平2（METTLERTOLEDOUMXZ，Max=2.1g，d=0.1μg，德国）
2.主要试剂
色谱纯试剂：丙酸乙酯、乳酸乙酯、糠醛、β-苯乙醇、己酸乙酯。
流动相相关试剂：乙腈（色谱纯）；乙酸（纯度99.5%）；磷酸二氢钾（纯度98%，）。
白酒样品
所有样品在进行实验前均保存在4℃冰箱中。所用水均为超纯水
实验步骤
1．标准溶液配制
将保存在4℃环境下的丙酸乙酯、乳酸乙酯、己酸乙酯、糠醛、β-苯乙醇标准品在室温下平衡2h后开始配制。重量法准确称取上述标准品各1mL，用60%乙醇水溶液在10mL容量瓶中定容，得到五种香味化合物浓度约为10
5mg/kg的储备液。将储备液用重量法进一步准确稀释7个数量级，即得0.01-105mg/kg浓度的标准曲线实验点。
2.混合标准溶液配制
采用重量法取4mL乳酸乙酯、200μL糠醛、20μLβ-苯乙醇、200μL丙酸乙酯、60μL己酸乙酯加入到20mL容量瓶中，以60%乙醇水溶液定容，得到上述香味化合物分别1000mg/kg、50mg/kg、5mg/kg、50mg/kg、3000mg/kg的混合标准溶液。
3．样品预处理
直接进样：不经过任何前处理直接进样。
色谱条件
色谱柱：ThermoHYPERSILODS-2（250mm×4.6mm，5μm），流动相A：乙腈，B：0.1%乙酸水溶液；流动相梯度洗脱程序如下图。流速：0.8mL/min；柱温：35℃；进样量：20μL。
5.标样与待测样检测，分别记录标样与待测样的保留时间与每种物质的峰面积

色谱条件的确定
选取100%乙腈和0.2%乙酸水溶液作为高效液相色谱的流动相，分离五粮液白酒中香味化合物成分。五种化合物的保留时间随着乙腈相比例的增加变短，但是保留时间过短将使化合物的峰面积受到溶剂峰的影响。为了获得合适的保留时间和令人满意的分离效果，本文首选大比例的有机相开始实验。分别选用85%，90%，95%的水相来分离乳酸乙酯和糠醛（如图3-2所示），实验
发现保留时间逐渐变长，为了得到良好的分离效果和较平滑的基线，选择了90%水相。但是以90%水相的条件，β-苯乙醇的保留时间将大于30分钟。为了减少分析时间，从15分钟起将水相比例调整为70%、80%、85%。70%的条件下β-苯乙醇出峰在基线下降的梯度上，影响β-苯乙醇峰面积的准确计算，水相80%时β-苯乙醇与丙酸乙酯能得到个较好的分离。低极性的己酸乙酯在分离时需要低极性的流动相，所以45%、50%、55%水相作为备选条件进行实验，最后选择了能将杂质分离开并能够节约时间的50%水