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食品加工学第十一章食品加工中的酶处理一、概念二、酶的探索与发现:2、近代发展 1833-1835年,淀粉的第一次酶解法国化学家AnselmePayen和ean-FranoisPersoz描述了从大麦的麦芽中分离淀粉酶多聚体的过程,并将之命名为淀粉酶。 1836年,德国生理学家TheodorSchwann在研究消化过程时,分离出一种在胃内消化蛋白的物质,将它命名为胃蛋白酶。这是第一个从动物组织中提取到的酶。 1883年,JohanKjeldahl建立了一套检测有机物中-3价氮的方法,即测定氮的含量的方法。 1894年,加酶食品的第一次商业化生产 1894-1913年,德国化学家EmilFisher根据糖化酶的特点建立了钥匙-锁理论。 1926年,科学家发现酶是蛋白质 1953-1958年,Watson和Crick发现DNA是双螺旋结构 1963年,碱性蛋白酶--洗涤剂用酶的突破 1965-1974年,淀粉工业的重大突破随着一种可以将淀粉分解成糖的,不含转葡萄糖苷酶的葡萄糖淀粉酶上市,微生物酶类应用于食品工业的首次重大突破于20世纪60年代发生。从20世纪50年代初开始,酶及产酶细胞的固定化技术在生产实践中得到迅速发展,引起食品、发酵工业一场大变革。 美国20世纪70年代初开始,使玉米淀粉经酶法液化、糖化和异构化并采用固定化技术,工业化生产第一代、第二代和第三代高果糖浆,代替蔗糖作为可口可乐、百事可乐等饮料食品的甜味剂。 1982年美国Cech研究组发现RNA分子中含有一个具有自身切接功能的片断,称为内含子,这种具有催化功能的RNA称为核酸类酶。 至目前为止,已发现自然界存在的酶有3000多种,但真正形成工业规模生产的只有几十种。3、现代酶学发展 70年代初实现DNA重组技术或称克隆技术,促使酶学研究进入新的发展阶段。 “工具酶”基因工程中所应用的系列酶的总称。 到目前为止,在基因工程中应用的工具酶已有500多种。 目前已有100多种酶基因克隆成功。 凝乳酶过去从小牛胃中提取,每年大约宰杀500万头小牛。 重组凝乳酶:DNA重组技术第二节酶的生产和利用一、微生物酶制剂的生产(二)生产步骤: 1、目的酶生产菌株的分离筛选 (1)从自然界分离筛选 (2)用物理、化学因子处理诱变 (3)用基因重组或细胞融合技术选育2、酶的生产 (1)要选择好的培养方法,包括培养基组成配比、培养温度、pH值、通气量等。 (图:微生物在相当于三层楼高的发酵罐里生长繁殖,产生所需的酶)(2)确定工业规模大量生产的一系列工程和工艺条件,以及培养罐的形式、大小、通气条件、温度和pH值的控制等。 (图:通过改变培养基类型、酸碱度、氧气浓度和温度,研究人员现了生产某种酶的微生物的最佳生长条件。)二、酶的提取、分离和纯化2、制取工业酶制剂的步骤: 第一步——除去出发酶液中的悬浮固形物,获得澄清酶液,必要时再进行减压浓缩; 第二步——根据质量要求和经济性采用适当方法(如用盐析法、有机溶剂沉淀法、丹宁沉淀法等)将酶沉淀分离; (图:只有酶和水能通过转鼓式过滤机;培养基和微生物则被留在硅藻土上。)第三步——收集沉淀、干燥、研粉、加适当的稳定剂、填充剂、做成粉末制剂。 酶粒是在大型连续运转的水平混合机内生产出来的。提取的酶与盐、纤维素及其他成分混合形成0.5mm大小的粒状物。然后用一种聚合体包裹,以防止酶尘在使用过程中可能引起的致敏危险。 (图:用多聚体包裹酶以减少酶尘引起的致敏危险。)3、其他方法 对于质量要求高可提取液中共存有妨碍目的酶工艺效果的其他酶时,常用一些特殊纯化方法将目的酶与其他酶和杂蛋分开,再分别沉淀制取。常用的方法有: (1)蛋白质选择性变性法 (2)分级盐析法 •有机溶剂分级沉淀法 •等电点法 •柱层析法 •电泳法 •亲和层析法三、酶的化学修饰技术五、固定化酶和固定化细胞2、固定化酶的特点 (1)省去了酶分离纯化的时间和费用; (2)可进行多酶反应; (3)保持了酶的原始状态,从而增加了酶的稳定性; (4)由于辅助因子存在和细胞内的连续性合成,酶的活力较为持久,半衰期在一个月以上,就有工业应用价值; (5)用固定化细胞反应柱或反应床可连续进行发酵,一边加入培养基,一边排出发酵液,可避免产物对酶活性的抑制。3、固定化酶的方法 (1)载体结合法 a、物理吸附法 是将酶吸附在活性炭、多孔玻璃、酸性白土、高岭土、硅胶等惰性载体上,此法对酶活性破坏较少,但吸附作用力常较弱而易脱落,因而常与交联法结合使用。 b、离子结合法 是利用离子键将酶及带有离子交换基团的不溶性载体,如离子交换树脂或带有交换基团的纤维素、葡萄聚糖结合在一起,此法操作简便,酶回收率也较高,但在较强离子强度下进行酶反应时易于脱落。 c、共价结合法 是利用共