一种灭活型病毒保存液配方及其制作方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113186251A(43)申请公布日2021.07.30(21)申请号202110686841.2(22)申请日2021.06.21(71)申请人江苏沃兴生物科技有限公司地址212000江苏省镇江市新区丁卯潘宗路38号2.5次产业园7号楼2层(72)发明人王斌李秀艳(74)专利代理机构南京创略知识产权代理事务所(普通合伙)32358代理人刘文艳(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)C12N7/00(2006.01)C12N7/06(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称一种灭活型病毒保存液配方及其制作方法(57)摘要本发明公开了一种灭活型病毒保存液配方及其制作方法，包括以下组分及各组分的重量数为：蛋白变性剂：高浓度胍盐，盐酸胍、异硫氰酸胍中的一种或多种组合，5‑20g；RNA酶抑制剂：0.5‑2g；缓冲稳定剂：Tris2‑6g；表面活性剂：十二烷基肌氨酸钠1‑4g；酸碱指示剂：0.001‑0.01g；防冻剂：0.2‑1g；所述RNA酶抑制剂采用的是EDTA、异硫氰酸胍中的一种或多种组合；所述酸碱指示剂采用的是碱性品红、中性品红中的一种；本发明实现了保存液安全无毒，可在低温下保持液体状态，方便采样，可灭活病毒并保护RNA酶降解病毒，并可以抵御细菌真菌生长，不易造成污染，可以长期保存和病毒检测，使病毒不具有传染性，避免了使运输和检测人员处于被感染风险中。CN113186251ACN113186251A权利要求书1/2页1.一种灭活型病毒保存液配方，其特征在于，包括以下组分及各组分的重量数为：蛋白变性剂：高浓度胍盐，盐酸胍、异硫氰酸胍中的一种或多种组合，5‑20g；RNA酶抑制剂：0.5‑2g；缓冲稳定剂：Tris2‑6g；表面活性剂：十二烷基肌氨酸钠1‑4g；酸碱指示剂：0.001‑0.01g；防冻剂：0.2‑1g。2.根据权利要求1所述的灭活型病毒保存液配方，其特征在于，所述RNA酶抑制剂采用的是EDTA、异硫氰酸胍中的一种或多种组合。3.根据权利要求1所述的灭活型病毒保存液配方，其特征在于，所述酸碱指示剂采用的是碱性品红、中性品红中的一种。4.根据权利要求1所述的灭活型病毒保存液配方，其特征在于，所述防冻剂为丙三醇、二甲亚矾和聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种组合。5.根据权利要求1‑4所述的灭活型病毒保存液配方，其特征在于，包括以下组分及各组分的重量数为：蛋白变性剂15g，其中高浓度胍盐、盐酸胍和异硫氰酸胍按1：1：1的比例组合；RNA酶抑制剂1.4g，其中EDTA、异硫氰酸胍按5：2的比例组合；Tris4.5g；十二烷基肌氨酸钠3.2g；中性品红0.008g；防冻剂0.7g，其中丙三醇、二甲亚矾和聚乙烯吡咯烷酮按2:2:3的比例组合。6.一种灭活型病毒保存液的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤（A），配置缓冲稳定溶液，将Tris2‑6g量取并加入至定量容器内部，再加入生理盐水定容至100ml；步骤（B），缓冲稳定溶液中加入蛋白变性剂，将蛋白变性剂5‑20g量取放置玻璃容器中混合，其中蛋白变性剂采用高浓度胍盐，盐酸胍、异硫氰酸胍中的一种或多种组合，混合后加入至缓冲稳定溶液内部，再搅拌3‑5min至均匀，制成混合液A；步骤（C），混合液A中加入RNA酶抑制剂，将RNA酶抑制剂0.5‑2g量取并加入至混合液A内部，其中RNA酶抑制剂采用EDTA、异硫氰酸胍中的一种或多种组合，再搅拌1‑2min至均匀，制成混合液B；步骤（D），混合液B中加入表面活性剂，将十二烷基肌氨酸钠1‑4g量取并加入至混合液B中，搅拌3‑5min至均匀，制成混合液C；步骤（E），混合液C中加入防冻剂，将防冻剂0.2‑1g量取并加入至混合液C中，其中防冻剂采用丙三醇、二甲亚矾和聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种组合，再搅拌1‑2min至均匀，制成保存液；步骤（F），保存液中加入酸碱指示剂，将中性品红0.001‑0.01g量取并加入至保存液内部，再搅拌3‑5min至均匀。7.根据权利要求6所述的灭活型病毒保存液的制作方法，其特征在于，步骤（F），保存液中加入酸碱指示剂，将中性品红0.001‑0.01g量取并加入至保存液内部，再搅拌3‑5min至均2CN113186251A权利要求书2/2页匀，具体过程为：（F1），量取中性品红0.001‑0.01g至玻璃容器中，并研磨1‑2min至均匀；（F2），将玻璃容器中的中性品红加入至配置好的保存液中，并搅拌3‑5min至均匀；（F3），灭活型病毒保存液的pH值6.0‑8.0，搅拌过程中观察保存液的颜色，若为黄色则封装保存液，若为红色则缓慢滴入生理盐水并搅拌，使保存液刚好由红色