一种可常温保存的灭活型病毒保存液及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113736755A(43)申请公布日2021.12.03(21)申请号202110949331.X(22)申请日2021.08.18(71)申请人江苏默乐生物科技股份有限公司地址225300江苏省泰州市海陵区健康大道805号G116幢6F-7F东(72)发明人李杨霞王稀莹贾俊玲曾丽(74)专利代理机构杭州杭诚专利事务所有限公司33109代理人尉伟敏(51)Int.Cl.C12N7/06(2006.01)权利要求书1页说明书13页附图1页(54)发明名称一种可常温保存的灭活型病毒保存液及其制备方法(57)摘要本发明涉及病毒保存液领域，公开了一种可常温保存的灭活型病毒保存液及其制备方法，保存液的原料包括：异硫氰酸胍190~210g/L；柠檬酸钠2~3g/L；十二烷基肌氨酸钠1.8~2.0g/L；HAc‑NaAc缓冲液55~65mL/L；二茂铁‑谷胱甘肽10~30mg/L；酸碱指示剂30~50mg/L。本发明在保存液中加入异硫氰酸胍、二茂铁‑谷胱甘肽及十二烷基肌氨酸钠，通过各组分的复配可以实现对病毒迅速灭活，并可以维持样本核酸的稳定性，可以在常温下长时间保存不降解，提高了核酸检测的准确性。CN113736755ACN113736755A权利要求书1/1页1.一种可常温保存的灭活型病毒保存液，其特征是，原料包括：异硫氰酸胍190~210g/L；柠檬酸钠2~3g/L；十二烷基肌氨酸钠1.8~2.0g/L；HAc‑NaAc缓冲液55~65mL/L；二茂铁‑谷胱甘肽10~30mg/L；酸碱指示剂30~50mg/L。2.根据权利要求1所述的一种可常温保存的灭活型病毒保存液，其特征是，所述HAc‑NaAc缓冲液的pH为4.0~4.5。3.根据权利要求1所述的一种可常温保存的灭活型病毒保存液，其特征是，所述酸碱指示剂为甲基红。4.一种如权利要求1~3任一所述的灭活型病毒保存液的制备方法，其特征是，包括如下步骤：（1）配制柠檬酸钠溶液；（2）配制十二烷基肌氨酸钠溶液；（3）配制HAc‑NaAc缓冲液；（4）配制异硫氰酸胍和二茂铁‑谷胱甘肽的混合溶液；（5）按各原料的比例将柠檬酸钠溶液加入异硫氰酸胍和二茂铁‑谷胱甘肽的混合溶液中，再加入十二烷基肌氨酸钠溶液，混合均匀后加入HAc‑NaAc缓冲液，再加入酸碱指示剂，用水定容；过滤、灭菌后得到所述灭活型病毒保存液。5.根据权利要求4所述的一种灭活型病毒保存液的制备方法，其特征是，步骤（1）中所述的柠檬酸钠溶液的浓度为0.65~0.75mol/L。6.根据权利要求4所述的一种灭活型病毒保存液的制备方法，其特征是，步骤（2）中所述的十二烷基肌氨酸钠溶液的质量分数为8~10%。7.根据权利要求4所述的一种灭活型病毒保存液的制备方法，其特征是，步骤（4）中的混合溶液中，异硫氰酸胍的浓度为190~210g/800mL。8.根据权利要求4所述的一种灭活型病毒保存液的制备方法，其特征是，步骤（5）中的灭菌温度120~125℃，灭菌时间25~35min。9.根据权利要求4所述的一种灭活型病毒保存液的制备方法，其特征是，步骤（1）~（5）使用的水为无酶无菌水。2CN113736755A说明书1/13页一种可常温保存的灭活型病毒保存液及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及病毒保存液领域，尤其是涉及一种可常温保存的灭活型病毒保存液及其制备方法。背景技术[0002]呼吸道病毒感染作为临床最常见的疾病之一，病原学复杂，大多数呼吸道病毒感染表现出相似症状，临床医师很难仅根据患者的临床表现作出准确诊断，精确的病原学分析不仅是确诊依据，也是合理选择治疗方案的基础。病毒性感染检测的金标准是实时荧光定量PCR，检测前需要提取疑似样本中的核酸(DNA、RNA)。而受到时间或距离的限制，一般需要将待测样本保存一段时间，或送至特定的地点才能进行检测。病毒保存液用于病毒样本采集保存运输工作，是采样管内浸没采样拭子病毒样本的一种保护病毒的被检测物质的液体，可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本，储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验。样本的采集和保存为病原体检测的关键步骤之一，是影响病原体检测结果准确性的重要因素之一。[0003]病毒保存液主要有非灭活型和灭活型两种，非灭活型病毒保存液不含裂解盐，同时保留了病毒的蛋白质外壳以及病毒核酸DNA或者RNA，这样病毒在体外具有蛋白抗原表位和核酸的完整性，检出率更高，但操作时有一定的感染性风险，安全性低。灭活型病毒保存液中添加有高浓度的裂解盐，能够迅速高效地使待测样本利的病毒蛋白裂解失活，可以有效防止操作员二次感染，同时又含有RNA酶抑制剂，能保护病毒核酸不被降解，适用于大多数病毒样本采集。例如，在中国专利文献上公开的