一种融合蛋白TpG、其编码基因、重组质粒、菌株及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113372455A(43)申请公布日2021.09.10(21)申请号202110673365.0A61K47/64(2017.01)(22)申请日2021.06.17A61P35/00(2006.01)C12R1/19(2006.01)(71)申请人山西大学地址030000山西省太原市坞城路92号(72)发明人丁国斌朱晨晨李卓玉武庚风李彬春(74)专利代理机构西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙)61223代理人崔瑞迎(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12N1/21(2006.01)A61K38/16(2006.01)权利要求书1页说明书10页序列表3页附图8页(54)发明名称一种融合蛋白TpG、其编码基因、重组质粒、菌株及应用(57)摘要本发明属于蛋白的基因工程领域，具体涉及一种融合蛋白TpG、其编码基因、重组质粒、菌株及应用。本发明的融合蛋白TpG的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本发明的融合蛋白TpG由硫氧还蛋白标签(Trx)、低pH插入肽(pHLIP)和植物毒素Gelonin三部分组成，本发明首次设计并成功原核表达具肿瘤酸度响应的植物毒素Gelonin(TpG)，并对其进行了系统全面的表征。在弱酸性条件下，TpG可更有效地内化进入肿瘤细胞，通过诱导肿瘤细胞凋亡和抑制胞内蛋白质合成来抑制肿瘤细胞生长。体内实验表明，与Gelonin相比，TpG可显著抑制肿瘤生长。本研究可为Gelonin的生物医学应用奠定理论和实验基础。CN113372455ACN113372455A权利要求书1/1页1.一种融合蛋白TpG，其特征在于，所述融合蛋白TpG的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的融合蛋白TpG，其特征在于，由硫氧还蛋白标签、低pH插入肽和植物毒素Gelonin三部分组成。3.编码权利要求1所述融合蛋白TpG的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。4.含有权利要求3所述基因的重组质粒，其特征在于，构建方法如下：化学合成如SEQIDNO.2第478位到第1344位所示的pHLIP‑Gelonin序列，将其连接在pUC57空质粒上，得到pUC57‑pHLIP‑Gelonin重组质粒，将pUC57‑pHLIP‑Gelonin重组质粒和pET32a质粒分别用相同的内切酶进行双酶切，然后将基因pHLIP‑Gelonin与质粒pET32a连接，得到重组质粒pET32a‑pHLIP‑Gelonin。5.含有权利要求4所述质粒的基因工程菌株，其特征在于，是将权利要求4的质粒转化到大肠杆菌中，得到含有融合蛋白TpG基因的基因工程菌株。6.权利要求5所述基因工程菌株的表达产物在制备治疗癌症的药物中的应用，其特征在于，所述表达产物为融合蛋白TpG。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述癌症包括但是不限定于卵巢癌、肺癌和结肠癌。2CN113372455A说明书1/10页一种融合蛋白TpG、其编码基因、重组质粒、菌株及应用技术领域[0001]本发明属于蛋白的基因工程领域，具体涉及一种融合蛋白TpG、其编码基因、重组质粒、菌株及应用。背景技术[0002]植物毒素Gelonin是一种来源于大戟科植物Geloniummuhiflorum种子中的蛋白，其分子量约为30kDa，属于I型核糖体失活蛋白。由于其N‑糖苷酶活性，Gelonin可以有效抑制蛋白质翻译，因而具有高效细胞杀伤力，是一种有效的抗肿瘤分子。然而，Gelonin缺乏与细胞膜结合的结构域、半衰期短、稳定性差，这就大大限制了其生物医学应用。发明内容[0003]本发明的目的之一在于克服现有技术的不足，提供一种融合蛋白TpG，所述融合蛋白TpG的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。[0004]进一步的，所述的融合蛋白TpG，由硫氧还蛋白标签、低pH插入肽和植物毒素Gelonin三部分组成。[0005]本发明的目的之二，提供编码所述融合蛋白TpG的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。[0006]本发明的目的之三是提供含有所述融合蛋白TpG基因的重组质粒，其构建方法如下：[0007]化学合成如SEQIDNO.2第478位到第1344位所示的pHLIP‑Gelonin序列，将其连接在pUC57空质粒上，得到pUC57‑pHLIP‑Gelonin重组质粒，将pUC57‑pHLIP‑Gelonin重组质粒和pET32a质粒分别用相同的内切酶进行双酶切，然后将基因pHLIP‑Gelonin与质粒pET32a连接，得到重组质粒pET32a‑pHLIP‑Gelonin。