一种可辐照灭菌的培养型病毒保存液.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113388665A(43)申请公布日2021.09.14(21)申请号202110665768.0(22)申请日2021.06.16(71)申请人扬州万禾生物科技有限公司地址225009江苏省扬州市邗江区司徒庙路526号(72)发明人张珉艳(74)专利代理机构北京沃知思真知识产权代理有限公司11942代理人唐丽萍(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)C12N7/00(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书1页说明书2页附图1页(54)发明名称一种可辐照灭菌的培养型病毒保存液(57)摘要本发涉及一种可辐照灭菌的培养型病毒保存液，主要包含以下主要成分：氯化钠，硫酸镁、氯化钾、氯化镁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、葡萄糖、蔗糖、维生素C、维生素E、两性霉素B、庆大霉素、链霉素、青霉素和酚红。本保存液可以在高达20kGy辐照强度下，维持酚红指示剂保持红色，在后续取样后起到pH指示剂的作用。本保存液可以直接保存采集于咽拭子，鼻拭子或特定部位组织样本中的病毒粒子，用于后续培养或核酸提取实验。CN113388665ACN113388665A权利要求书1/1页1.一种可辐照灭菌的培养型病毒保存液，其特征在于：(1)维持细胞渗透压，防止细胞破裂；(2)供给细胞营养；(3)辐照保护剂，保证溶液中的酚红在高达20kGy辐照后维持其红色，在后续取样后起到pH指示剂的作用。2.根据权利要求1所述的一种可辐照灭菌的培养型病毒保存液，其特征在于：维持细胞渗透压的缓冲物质为氯化钠0.7‑0.9％，硫酸镁0.001％‑0.01％、氯化钾0.01％‑0.1％、氯化镁0.01％‑0.1％、磷酸氢二钠0.001％‑0.01％、磷酸二氢钾0.001％‑0.01％、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸0.1％‑1％。3.根据权利要求1所述的一种可辐照灭菌的培养型病毒保存液其特征在于：供给细胞营养的物质为精氨酸0.001％‑0.05％、半胱氨酸0.001％‑0.05％、谷氨酰胺0.001％‑0.05％、甘氨酸0.001％‑0.05％、组氨酸0.001％‑0.05％、异亮氨酸0.001％‑0.05％、亮氨酸0.001％‑0.05％、甲硫氨酸0.001％‑0.05％、苯丙氨酸0.001％‑0.05％、丝氨酸0.001％‑0.05％、苏氨酸0.001％‑0.05％、色氨酸0.001％‑0.05％、酪氨酸0.001％‑0.05％、缬氨酸0.001％‑0.05％、葡萄糖0.1％‑1％、蔗糖0.1％‑1％。4.根据权利要求1所述的一种可辐照灭菌的培养型病毒保存液其特征在于：保证溶液中的酚红在辐照后维持其红色，在后续取样后起到pH指示剂作用的辐照保护剂为维生素C0.1％‑1％、维生素E0.1％‑1％。2CN113388665A说明书1/2页一种可辐照灭菌的培养型病毒保存液技术领域[0001]本发明涉及生物医药技术邻域，具体涉及一种可辐照灭菌的培养型病毒保存液。背景技术[0002]目前对于SARS‑CoV‑2感染，最主要的检测方法是核酸检测。临床大多采用实时荧光RT‑PCR技术或反转录‑聚合酶链式反应，采用的样本为感染者的鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液及粪便等，这些都含有SARS‑CoV‑2特异性的RNA序列。在某些场景下，医护人员也需要分离，培养出病毒粒子，进行下一步的鉴定等实验。如需培养病毒，则必须选择非灭活型的病毒保存液，比如Hanks液、PBS缓冲液，生理盐水等。然而，传统的Hanks、PBS缓冲液只能起到缓冲作用，本身不提供营养给细胞，而生理盐水则是只具有维持渗透压的作用。一般而言，改进型的Hanks，如DMEM等细胞培养液具有维持细胞渗透压，提供营养物质，且含有酚红，可以即时监控溶液pH。然而，此类细胞培养液由于含有大量氨基酸、糖等营养物质，极易染菌，需要在高级别的无菌环境中才能生产、灌装。[0003]由于新冠疫情的肆虐，市场上急需大量的培养型病毒保存液，传统的超净台灌装的产能远远达不到市场需求。然而，在万级洁净间进行培养型病毒保存液，极易生菌污染。不仅如此，如果在灌装后立刻进行辐照灭菌，虽然起到了灭菌的效果，但高强度辐照(高于10kGy)会导致培养液中的酚红失去颜色，从而失去了即时检测pH的能力。[0004]因此，急需开发一种培养效果与传统DMEM等培养液一致，且可以在高达20kGy辐照灭菌后保持酚红颜色不变的可辐照灭菌的培养型病毒保存液。发明内容[0005]本发明提供一种可辐照灭菌的培养型病毒保存液，其保存液效果与传统的Hanks及其