一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒和方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113419069A(43)申请公布日2021.09.21(21)申请号202110664574.9(22)申请日2021.06.16(71)申请人东软威特曼生物科技（南京）有限公司地址210039江苏省南京市雨花台区西善桥南路108号2号楼(72)发明人孙文勇常俊骏(74)专利代理机构深圳至诚化育知识产权代理事务所(普通合伙)44728代理人刘英(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒和方法(57)摘要本发明公开了一种本发明提供的一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其包括预包被液，预包被液具有链霉亲和素和碳纳米管结合体。首先把预包被液加入到包被孔内进行预包被，然后把包被液加入到包被板的孔内；得到包被有抗环瓜氨酸肽抗原‑链霉亲和素‑碳纳米管的包被板；然后加入辣根过氧化物酶羊抗兔IgG试剂；然后加入邻苯二胺显示底物试剂，加入硫酸终止试剂，最后用酶联免疫检测仪记录读数。通过链霉亲和素的引入使得这种预包被液对于包被板的负载作用增强，从而使得其在板体上以更为均匀和分散的方式实现负载从而提高了其在包被板上的结合速率和效果，这样就使得后面的包被步骤的时间缩短，并且也相应地使得灵敏度得到了提高。CN113419069ACN113419069A权利要求书1/1页1.一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：包括预包被液，所述预包被液具有链霉亲和素和碳纳米管结合体。2.根据权利要求1所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：所述碳纳米管为疏水性碳纳米管，所述疏水性碳纳米管为聚偏氯乙烯复合的碳纳米管。3.如权利要求2所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：还包括抗环瓜氨酸肽抗原包被试剂，所述包被试剂中含有浓度为0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，包被试剂的pH为9.6，蛋白质含量为1μg/ml至10μg/ml。4.如权利要求3所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于：还包括辣根过氧化物酶羊抗兔IgG试剂、邻苯二胺显示底物试剂、2mol/L的硫酸终止试剂。5.根据权利要求4所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒的工作方法，其特征在于，包括下面的步骤：S1：首先把所述预包被液加入到包被孔内进行预包被，37℃下温育1小时；然后把包被液加入到包被板的孔内；进行37℃的温育后在4℃下反应5小时至6小时；S2：将包被板内的液体倒出后加入洗涤试剂，且倒出和洗涤的过程重复三次得到包被有抗环瓜氨酸肽抗原‑链霉亲和素‑碳纳米管的包被板；S3：把待检测样品放入到所述包被板内，并且设定对照组，在37℃下反应2小时至3小时；S4：再次通过洗涤试剂重复三次进行倒出和洗涤的过程，然后加入辣根过氧化物酶羊抗兔IgG试剂，在37℃下反应1小时；S5：再次通过洗涤试剂重复三次进行倒出和洗涤的过程，然后加入邻苯二胺显示底物试剂，于黑暗环境下在37℃下反应15分钟；S6：加入硫酸终止试剂，最后用酶联免疫检测仪记录读数。6.根据权利要求2所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒的工作方法，其特征在于，包括下面的步骤：S1：把羧基化的碳纳米管颗粒加入到缓冲液中，然后加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基硫代琥珀酰亚胺进行活化；S2：收集活化后的碳纳米管颗粒并且加入到链霉亲和素中进行混合搅拌，得到链霉亲和素和碳纳米管的结合体；S3：把链霉亲和素和碳纳米管的结合体在无水乙醇中进行超声分散，然后加入聚偏氯乙烯，再次进行超声分散步骤，相应得到均匀分散的液体；把液体倒出后进行烘干，然后干燥得到粉末，该粉末为链霉亲和素‑碳纳米管‑聚偏氯乙烯的结合体。2CN113419069A说明书1/3页一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒和方法技术领域[0001]本发明具体涉及一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒和方法。背景技术[0002]抗环瓜氨酸肽抗体为一种能够反应合成环化瓜氨酸多肽(CCP)为抗原的生物抗体，这种抗体对于类风湿关节炎这种疾病能够很好地进行特异性指示判断，因此能够作为这种疾病在早期进行检测而进行诊断的重要指标物质之一。在实践的临床中，一般会采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行这种抗体的检测。[0003]在实际的采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行抗环瓜氨酸肽抗体检测的时候，其中一个问题需要特别留意，就是检测的灵敏度不足，容易出现部分阳性样本无法被检测出来的问题，另外就是在进行包被的过程即把抗环瓜氨酸肽抗原包被在聚苯乙烯板体上的时候需要的时间过长，一般需要达到20个小时，这样就明显降低了工作效率。究其原因，这是因为抗原的分子量不足，其与聚苯乙烯载体的结合速率慢且分散性不够，导致在一些位点不能完成结合或者很难结合，因此造成了上述