汞离子检测探针的制备方法和汞离子含量的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113527160A(43)申请公布日2021.10.22(21)申请号202111077162.1(22)申请日2021.09.15(71)申请人北京大学生命科学华东产业研究院地址226200江苏省南通市启东市经济开发区创新型经济园双子楼2号楼9楼(72)发明人吴江(74)专利代理机构南通锦惠知识产权代理事务所(普通合伙)32384代理人钱靓(51)Int.Cl.C07C319/14(2006.01)C07C319/28(2006.01)C07C323/52(2006.01)G01N21/64(2006.01)C09K11/06(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称汞离子检测探针的制备方法和汞离子含量的检测方法(57)摘要本发明公开了一种汞离子检测探针的制备方法和汞离子含量的检测方法，该方法以蒽环和二硫缩醛基团构建荧光体系的探针，利用汞与硫原子反应的特殊亲和性，改变推拉电子效应，使其对汞离子进行特异性响应。由于汞离子能够促使探针分子脱掉硫原子重新还原成蒽醛，会有新的荧光发射峰产生，继而实现了对汞离子的检测。本发明提供的蒽环和二硫缩醛基团构建的荧光性质汞离子探针，对汞离子溶液具有特异的响应，能够实现对微量汞离子的定量分析。本发明具有灵敏高、操作简单，成本低廉应用广泛等优点。CN113527160ACN113527160A权利要求书1/1页1.一种汞离子检测探针的制备方法，其特征在于，合成步骤如下：步骤一：在干燥的四口瓶中，将9‑蒽甲醛和巯基乙酸溶解于无水二氯甲烷溶液，室温搅拌5分钟，然后更换冰水浴，向反应液中缓慢滴加三氟化硼的乙醚溶液，保持0‑4℃继续搅拌反应12小时；步骤二：将水加入四口瓶中淬灭反应，搅拌15分钟后，分批加入二氯甲烷萃取反应液，重复此操作3次，并合并萃取的有机相溶液，然后用饱和食盐水洗涤有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到粗品；步骤三：将粗品溶解于二氯甲烷溶液中，通过柱层析方法纯化，得到最终产物化合物（I），化合物（I）为9‑蒽二乙酸硫缩醛，其分子式为C19H10O4S2，结构式为下图：；所述柱层析时，干法拌样所需硅胶质量为粗品的1.5‑3倍，硅胶柱填入硅胶质量为粗品的20‑30倍；柱层析时，采用梯度洗脱的方式，洗脱剂为二氯甲烷和甲醇的混合物，二氯甲烷与甲醇的体积比为二氯甲烷：甲醇=100:1～10：1。2.一种采用权利要求1制成的汞离子检测探针进行汞离子含量的检测方法，其特征在于：步骤如下：步骤一：在不同浓度梯度的汞离子缓冲溶液中加入相同浓度的所述化合物（I），配制成标准溶液备用；所述标准溶液为磷酸盐缓冲溶液，pH值为5‑10；所述标准溶液汞离子的浓度为：10nM‑100uM；加入的化合物（I）的浓度为：100nM‑1uM；步骤二：分别测定所述标准溶液中加入相同浓度的化合物（I）的荧光发射光谱，激发波长为370nm，以汞离子浓度为横坐标，以波长524nm处荧光发射峰强度为纵坐标，建立标准曲线；步骤三：向待测样品中加入所述化合物（I），使其浓度与标准溶液中加入的所述化合物（I）的浓度相等，测定其在相同激发波长下荧光发射光强度，即可根据标准曲线计算待测样品的汞离子含量。2CN113527160A说明书1/5页汞离子检测探针的制备方法和汞离子含量的检测方法技术领域[0001]本发明制造小分子荧光探针属于分析检测领域，具体涉及到了一种能够应用于汞离子检测分析的荧光探针的制备方法和汞离子含量的检测方法。背景技术[0002]汞是自然界普遍存在的一种重金属元素，广泛存在于空气、水和土壤中，具有严重的生理毒性。自从上世纪中期日本水俣病发生后，汞及其化合物的危害引起了广泛的关注。汞因不能降解，且很容易被皮肤以及呼吸道和消化道吸收，在生物体内积累，最终通过食物链进入人体。过量积累的汞可能诱发强烈的中枢神经系统损伤，导致各种认知和运动障碍。因此，开发一种灵敏度高、特异性强的汞元素检测方法对于人类的生命健康具有重要意义。[0003]目前，传统的方法是利用原子吸收、电感耦合等离子质谱等精密仪器检测汞离子，但设备成本高，操作复杂，难以实现生物体内的非破坏性实时在线检测，而国内外报道的大多是基于半菁染料为母体开发检测汞离子的荧光探针，其中大部分探针易受其它金属离子的干扰，或是水溶性不好，或是反应灵敏度不够。荧光探针需要有选择性强及灵敏度高，并具备一定的环境适应能力，良好的生物相容性。发明内容[0004]本发明能够克服上述技术中的不足之处，提供一种检测汞离子蒽环类荧光分子探针的制备及使用方法。[0005]本发明提供一种汞离子检测探针，其命名为9‑蒽二乙酸硫缩醛，其分子式为C19H10O4S2，结构式为下图：（Ⅰ）。[0006