实验八+微生物的接种技术及分离纯化-.ppt

实验八微生物的分离纯化及平板计数1．掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本操作技术。2．学习平板菌落计数的基本原理和方法实验原理吸取稀释液取一吸管，以无菌操作法分别吸取10－5、10－6、10－7土壤稀释液0.1mL，加在已制好的平板培养基上。
涂板用玻璃刮刀将稀释液在培养基上充分混匀铺平，倒置于恒温箱培养。
计算出每克土壤中细菌的数量。即用某一培养皿内的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得。
挑取单个菌落，进行划线分离。微生物的分离—平板倾注法微生物的分离—平板划线法实验材料实验步骤3．涂布选择3个连续梯度（10-4、10-5、10-6），每个稀释度涂布2个平板，涂布时用无菌吸管每个平板滴加0.1mL，用无菌玻棒涂布均匀。
4．培养37℃倒置培养过夜。
5．计数并检验产胞外淀粉酶的菌株
总菌落计数完后，将平板内滴加1-2ml卢戈氏碘液，菌落周围产生透明圈的菌落就是产胞外淀粉酶的菌株，观察并计数二、划线分离（1）计算相同稀释度的平均菌落数有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此一半计数×2（2）选择平均菌落数在30～300之间的平板只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。有两个在30～300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。（3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘稀释倍数。（4）所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘稀释倍数。（5）所有菌落数均不在30～300之间，以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数。实验报告思考题上次实验习题解答2、某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1-2中可行的检测方法。

①首先将干酵母粉稀释成一定的浓度，用血球计数板直接计数，统计总菌量，然后采用平板稀释法计数活菌量，两者的比值为活菌存活率。
②也可将干酵母粉稀释成一定的浓度，用分光光度计测出光密度值，再换算出总菌量，然后采用平板稀释法计数活菌量，两者的比值为活菌存活率