大肠菌群检测(三).ppt

实训目的实训仪器与设备实训步骤LST肉汤BGLB肉汤结果

1：10产气产气阳性
1：100产气产气阳性
1：1000产气产气阳性2、BGLB液体接种

将产气的LST肉汤培养基进行液体接种。
在酒精灯上灼烧接种环，从LST肉汤培养基中挑取一环菌液，接种于BGLB肉汤培养基中，36℃培养48小时后。观察产气情况。液体接种操作要点：

1、操作前消毒
2、接种环灼烧完全，镍丝要烧红。
3、棉塞夹于拿接种针手的无名指和小指之间
4、打开棉塞后试管口要在酒精灯旁，避免杂菌进入。1、观察试管内的小倒管，如果小倒管有气泡存在或者小导管上漂，说明试管产气。

2、首先点燃酒精灯，在酒精灯旁进行操作。其次接种前充分灼烧接种针，将镍丝烧红为止。接种时将试管放于酒精灯上方火焰外焰处，棉塞加于无名指和小指之间。

3、吸量管在使用前进行灼烧，拿管要求远离实训服，使用前检查是否包扎完好无玻璃外露。思考题：
1、大肠菌群检测流程
2、回顾初发酵试验步骤
3、大肠菌群检测涉及到几种培养基？LST肉汤培养基的制备步骤、配方是什么？

2、初发酵实验步骤
1）称取25g固体样品，加入225mL无菌水中，均质制备成1：10样品溶液。
2）用1只1mL无菌吸量管吸取1：10样品溶液，用无菌方法各取1mL，分别加入到3只LST肉汤培养基中。
3）吸取1mL1：10样品溶液，加入到装有9mL无菌试管中摇匀，制备成1：100样品溶液。
4）换1只吸量管各取1mL1：100溶液，加入到3只LST肉汤培养基中。
5）吸取1mL1：100样品溶液，加入到装有9mL无菌试管中摇匀，制备成1：1000样品溶液。
6）换1只支吸量管各取1mL1：1000溶液，加入到3只LST肉汤培养基中。
7）36度±1度，48小时±2小时培养后观察3、2种培养基，LST肉汤培养基和BGLB肉汤培养基。
LST肉汤培养基：胰蛋白胨或胰酪胨20.0g氯化钠5.0g乳糖5.0g
磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75g
磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75g
月桂基硫酸钠0.1g
蒸馏水1000mLpH6.8±0.2
将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。