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北京康为世纪生物科技有限公司内容microRNA 长度20∼24nt单链小分子RNA 与目标基因3’端非编码区的识别位点相结合 导致目标基因mRNA分子稳定性下降,半衰期变短,或mRNA分子结构变化(5‘脱帽),从而表达水平下降。 microRNA的来源miRNA前体与成熟体靶点识别–不严格互补配对miRNA与siRNA的异同miRNAsiRNAmiRNA检测与定量miRNA芯片–基因表达谱Pre-miRNA检测SpecificmiRNAquantificationbyrealtimePCR–waytogo解决miRNA丰度难题M123成熟miRNAqPCR检测-Poly(A)加尾法成熟miRNAqPCR检测–茎环法检测方法选择康为miRNA产品康为miRNA检测服务(RealtimeQuantitativePCR)PCR:伟大的天才发明PCR:理想与现实扩增曲线--Ct值: 模板DNA量越多,荧光强度达到检测域值所需的循环数越少, 即Ct值越小。 Real-timePCR:检测原理Taqman工作原理染料法与探针法对比Real-timePCR应用基因表达分析检测内参基因的选择HousekeepingGene康为产品基因表达分析检测样本处理与RNA提取RT-qPCR一步法还是两步法?逆转录总原则与普通PCR相同: 避免引物二聚体,避免二级结构 扩增片段长度(80–300bp) 推荐做跨intron设计反应条件优化反应条件优化图2反应条件优化MasterMix的应用MasterMix的应用 误差控制 使用Mastermix 配置预混体系 设置生物学重复 (不同个体) 技术性重复(复孔) 阴性对照 2-ΔΔCt法Troubleshooting荧光定量产品--染料法荧光定量产品--染料法康为世纪产品外包服务