黄酮含量的测定.ppt

《仪器分析实验》
黄酮含量的测定吸光光度法是基于被测物质的分子对光具有选择吸收的特性而建立的分析方法。一、物质对光的吸收与吸收光谱吸收光谱AbsorptionSpectrum定性分析与定量分析的基础二、溶液的吸光定律吸收定律与吸收光谱的关系吸光度的加合性三、吸光分析仪的基本构造单波长单光束分光光度计单波长双光束分光光度计实验二黄酮类物质含量的测定3．操作步骤
（1）样品处理
1）固体样品：
称取1～2g干燥的固体样品，用滤纸包紧，置于索氏提取器
中，加入50～100ml70％乙醇溶液浸润后，在80℃水浴下回流
3h，至提取液无色为止。粗提液冷却后，减压抽滤，并用少量
25％乙醇溶液洗涤滤渣，合并滤液。在50℃下减压蒸馏，除去
其中的乙醇，直至索氏提取器内溶液呈无醇味。倒出容器内溶
液，用30ml热水分3次洗涤，抽滤后，将滤液倒入分液漏斗
中，以75ml氯仿分3次萃取脱脂，待完全分层后，收集各次下
层水溶液并定容至50ml。
2）液体样品：
准确吸取1.0ml样品，定容至50ml后，直接以75ml氯仿分3
次萃取脱脂，其余步骤同上。（2）标准曲线的绘制：
准确吸取芦丁标准溶液0、0.50、1.00、2.00、
3.00、⒋00ml（相当于芦丁0、75、150、300、450、
600ug），移入10ml刻度比色管中，加入30％乙醇溶
液至5ml，各加5％亚硝酸钠溶液0.3ml，振摇后放置
5min，加入10％硝酸铝溶液0.3ml摇匀后放置
6min，加1.0mol／L氢氧化钠溶液2ml，用30％乙醇
定容至刻度。摇匀，放置15min，于510nm波长处测
定吸光度，以零管为空白，以芦丁含量（ug）为横
坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，计算相关
系数（r）。（3）样品测定：
根据样品中总黄酮含量高低，取适宜体积待测
液，按标准曲线制备操作步骤于510nm处进行吸光度
的测定（样液如有沉淀，应过滤后测定）。
4.结果计算
根据标准工作曲线，求出相当于样品吸光度的芦
丁含量。