实验——总黄酮含量的测定.doc

《有机分析实验讲义》植物中总黄酮的提取与测定黄酮类化合物主要指以2—苯基色原酮为基核的化合物主要有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、花色素、查尔酮等以及它们的衍生物。其主要结构式如图。图黄酮类化合物分子结构式黄酮类化合物主要结构类型见表。表黄酮类化合物主要结构类型原理黄酮母核中含有碱性氧原子一般又多带酚羟基能和铝离子产生黄色络合物又加入亚硝酸钠和氢氧化钠使在碱性溶液中呈红色溶液在510nm处有最大吸收显色反应在60min内稳定。用芦丁作为对照品用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂吸光度与芦丁的浓度呈线形关系采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。仪器与试剂新锐T6型紫外可见分光光度计；Explrer型电子天平（0.1mg）。60%的乙醇溶液；5%亚硝酸钠溶液；10%硝酸铝溶液。芦丁标准溶液的配制称量13.2mg芦丁用60%乙醇定容到25ml容量瓶作为标准溶液。标准曲线的制作准确吸取00.40.81.21.62.0ml芦丁标准溶液放入10毫升容量瓶内（写明标记）分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0ml的60%乙醇溶液；再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀放置6min；加入10%硝酸铝溶液0.5ml放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml加60%乙醇定容摇匀后放置15min；（扫描找到最大吸收）在510nm处测定吸光度。用0.0ml作为空白用芦丁含量的浓度作为横坐标纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度作标准曲线。3.6.4总黄酮提取与测定和计算称取0.6—0.8g样品粉末加入60ml60%乙醇放于100ml圆底烧瓶内置于水浴锅上70℃条件下回流提取60min。过滤、定容于100ml.吸取样品量（根据样品的吸光度调整）1.0ml放入10毫升容量瓶内（写明标记）用60%乙醇加到2.0ml；加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀放置6min；加入10%硝酸铝溶液0.5ml放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml摇匀后加60%乙醇定容放置15min；在510nm处测定吸光度。根据标准曲线计算总黄酮的含量。总黄酮含量=100×稀释倍数A为标准曲线中的含量。例如：测得的吸光度=0.504Y=0.0101x+0.0017A===49.73M为样品的质量(mg)