实验五、氨基酸的分离鉴定--滤纸层析法.ppt

实验一、氨基酸的分离鉴定一、实验目的二、实验原理各组分由于移动速度不同，物质被分离后在层析纸上的位置也不同，可用Rf值来表示：

原点到层析点中心距离
Rf＝———————————
原点到溶剂前沿的距离

在一定的条件下某物质的Rf值是常数，可作为定性分析的依据。Rf值大小与样品物质的结构性质、溶剂系统、层析滤纸的质量及展层方式、温度、样品溶液中的杂质等因素有关。物质结构与性质同一物质在不同的溶剂系统中，Rf值不同。在同一溶剂系统中，溶剂各组分比例不同时，Rf值也有差别。溶剂系统选择应注意以下原则：
1）通常选用与水部分混溶的有机溶剂或与水相混溶的其他溶剂作为展层剂。
2）溶剂系统应选相对稳定二元或多元混合溶剂，各成分之间不起化学反应，挥发性太大的溶液不宜作溶剂。
3）样品分离各组分一般Rf值0.05~0.85之间，彼此间差值不应小于0.05，样品与标样差值<0.05基本确认为同一种物质。
4）溶剂的规格应选用色谱纯或分析纯，必要时重新蒸馏。展层方式三、器材四、试剂五、操作
溶剂前沿

层析点

原点3、平衡：点样好的滤纸卷成圆筒状用线缝好与盛有平衡剂的小烧杯，置于密闭的层析缸中，平衡1-2小时。

4、扩展：将盛有约20ml左右扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中，密闭好层析缸。待溶剂上升到15—20cm时即取出滤纸，立即用铅笔描出溶济前沿，吹风机或烘箱干燥。图1-2滤纸缝合示意图5、显色：用喷雾器均匀喷上0.1%的茚三酮正丁醇溶液，干燥。

6、计算：用铅笔描出各层析斑点的轮廓，并计算各氨基酸的Rf值。图谱显示注意事项：
1、要保证层析滤纸不被污染，特别是从点样线到溶剂前沿的部分。
2、各氨基酸样品点样时量要均匀。
3、在缝滤纸时，纸的两边不能接触。
4、点样的一端朝下，扩展剂的液面需低于点样线1cm。六、实验结果七、分析讨论八、思考题