氨基酸的分离鉴定―纸层析法.ppt

氨基酸的分离鉴定―纸层析法通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。以水（被滤纸纤维结合）作为固定相，以有机溶剂为流动相，样品点在滤纸上进行展层，氨基酸在两相中不断分配，因为分配系数不同，故样品随流动相移动的速率不同，从而被分开，形成距原点距离不等的层析点。
氨基酸被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的：
Rf=原点到层析中心的距离/原点到溶剂前沿的距离器材1、氨基酸溶液0.5％的赖氨酸、亮氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0.5％)。

2、扩展剂
4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物。将20mL正丁醇和5mL冰醋酸放人分液漏斗中，与15mL水混合，充分振荡，静置后分层放出下层水层。

3、显色剂0.1％水合茚三酮正丁醇溶液。1平衡将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。（单相可不做）

2准备滤纸取层析滤纸(长22cm、宽14cm)一张。纸的窄边朝下，距下端2cm处用铅笔划一条与底边平行的直线，在此直线上每间隔2cm作一记号（×）。

3点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在中间5个记号（×）上，吹干后再点一次。每点在纸上扩散的直径，最大不超过5mm。

4扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。用胶带粘住两边。将盛有约20mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中(点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1cm)。待溶剂前沿上升15―20cm时即取出滤纸，铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。

5显色用喷雾器均匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(80℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。

6计算各种氨基酸的Rf值。1、何谓纸层析法?怎样制备扩展剂?层析缸中平衡溶剂的作用是什么?
2、何谓Rf值?影响Rf值的主要因素是什么?
3、分配系数？
4、讨论AA极性与Rf的关系