高效液相色谱常见故障.doc

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高效液相色谱仪常见故障的断定及解决
(一)高效液相色谱仪保留时间变化
1.柱温变化柱恒温，必要时需配置HYPERLINK"http://info.edu.hc360.com/zt/liyan/index.shtml"\t"_blank"恒温箱
2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
3.缓冲液容量不够用〉25mmol/L的缓冲液
4.柱污染每天冲洗柱
5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相
6.柱快达到寿命采用保护柱
(二)高效液相色谱仪保留时间缩短
1.流速增加检查泵,重新设定流速
2.样品超载降低样品量
3.键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向
4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀
5.温度增加柱恒温
(三)高效液相色谱仪保留时间延长
1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡
2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱
3.键合相流失同前(二)3
4.流动相组成变化同前(二)4
5.温度降低同前(二)5
(四)高效液相色谱仪出现肩峰或分叉
1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%
2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂
3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品
5.进样器损坏更换进样器转子
(五)高效液相色谱仪鬼峰
1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗
2.样品中未知物处理样品
3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)每天新配,用抗氧化剂
5.水污染(反相)通过变化平衡时间检查水质量，
用HPLC级的水
(六)高效液相色谱仪基线噪声
1.气泡(尖锐峰)流动相脱气,加柱后背压
2.污染(随机噪声)清洗柱,净化样品,用HPLC级HYPERLINK"http://www.search.hc360.com/cgi-bin/seinterface.cgi?word=试剂"\t"_blank"试剂
3.检测器灯连续噪声更换氘灯
4.电干扰(偶然噪声)采用HYPERLINK"http://www.search.hc360.com/cgi-bin/seinterface.cgi?word=稳压电源"\t"_blank"稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)
5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压
(七)高效液相色谱仪峰拖尾
1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相
2.峰干扰HYPERLINK"http://www.clean.hc360.com/"\t"_blank"清洁样品,调整流动相
3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品
4.同前(四)4同前(四)4
5.同前(四)35.同前(四)3
6.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管
7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱
(八)高效液相色谱仪峰展宽
1.进样体积过大同(四)1
2.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散
3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点
4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%
5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相
6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器
7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱
8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至最小
9.样品过载进小浓度小体积样品
既使日常精心维护的液相HYPERLINK"http://www.search.hc360.com/cgi-bin/seinterface.cgi?word=色谱仪"\t"_blank"色谱仪，随着使用时间的增加或使用者经验不足也会出现一些问题或故障。1.保留时间变化保留时间的变化有三中情况：波动、缩短、延长。保留时间出现波动时，应检查柱温是否处于恒温状态，如果设置为室温，气温的变化会引起保留时间的波动，应该设置为恒定温度;等度和梯度间还没有充分达到平衡状态时，应该用十倍以上柱体积的流动相去平衡色谱柱;缓冲液浓度太低时，应换用>25mmol/L的缓冲液;色谱柱被污染或已经接近柱寿命时，应更换保护柱或换新色谱柱。保留时间缩短时，流速增加，应检查流速的设定;柱温高时，应检查柱的设置;进样量太大时，减少样品用量或降低样品浓度;流动相的组成发生了改变，比如流动相中易挥发有机相蒸发，两相之间互溶不好，会导致流动相不均匀或某一相出现部分沉淀;流动相的PH值应保持3~7.5范围内，否则会引起柱键合相的流失。保留时间延长时，流速减小，应检查流