化学发光免疫分析技术.ppt

化学发光免疫分析
一、化学发光免疫技术的概念化学发光免疫分析的优势二、化学发光免疫分析基本原理三、化学发光免疫分析的类型用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光。
由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比，可从标准曲线上计算出待测抗原的含量。发光磁微粒模式图化学发光酶免疫分析（chemiluminescenceenzymeimmunoassay，CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
该分析系统采用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶（HRP）标记抗体复合物，这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发光增强剂使产生化学发光。该分析系统以碱性磷酸酶标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。分析步骤电化学发光免疫分析（electrochemiluminescenceimmunoassay，
ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记
抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体，
在电场中因电子转移而发生特异性化学发光
反应，它包括电化学和化学发光两个过程。
在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体(抗原)，用三联吡啶钌标记抗体(抗原)，在反应体系内待测标本与相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成磁性微粒包被抗体-待测抗原-三联吡啶钌标记抗体复合物，这时将上述复合物吸入流动室，同时引人TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强度与待测抗原的浓度成正比。电化学发光免疫测定示意图标记磁颗粒在电场中发光工作示意图目前我院最新引进的迈瑞CL-2000i全自动化学发光免疫分析系统主要以化学发光酶免疫分析为主。拥有国内完全自主知识产权，它的酶促化学发光是目前免疫诊断中最灵敏的化学发光体系之一，其核心性能达到了国际同类产品先进水平。该机采用高灵敏全球主流化学发光技术的CL-2000i分析系统，拥有业内领先的高效处理能力，可实现240T/H检测；智能优化的测试流程，专利逻辑设计，提升测试通量，瀑布式真空气吸清洗技术降样本携带干扰至最低，涵盖甲状腺功能、激素、肿瘤标志物、传染病等50多个检测项目。
目前我科开展肿瘤标志物，甲状腺功能检测，生殖内分泌激素检查项目，后续依临床需要酌情开展新的项目，更好的服务临床，服务患者四、临床应用甲状腺功能检测项目及临床意义甲状腺素（T4）血清中的三碘甲状腺原氨酸（T3）游离甲状腺素（FT4）游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）促甲状腺激素（TSH）促甲状腺激素（TSH）肿瘤标志物（tumormarker，TM）肿瘤标志物临床应用甲胎蛋白(AFP)参考值：<7.0ng/ml癌胚抗原（CEA）参考值：<4.5ng/ml铁蛋白（SF）男:27-375ug/l女:12-135ug/l乳腺癌相关抗原（CA15-3）参考值：<15U/ml卵巢癌相关抗原（CA125）:参考值：<35U/ml胰腺胃肠癌相关抗原（CA19-9）参考值：<30U/ml总前列腺特异性抗原（TPSA）参考值：<4.0ng/ml游离前列腺特异性抗原（FPSA）参考值:<1ng/ml肿瘤标志物的相关肿瘤肿瘤标志物的联合应用性激素检测系列卵巢、子宫内膜与激素水平雌二醇E2雌三醇E3孕激素PROG雄激素TESTO垂体催乳激素PRL垂体促性腺激素（LH和FSH）人绒毛膜促性腺激素（HCG）甲状腺素与性激素五、发展与展望目前我科室开展的成熟项目简介全程CRP全程CRP临床应用心梗三联心梗三联临床应用肌钙蛋白定量肌钙蛋白定量临床应用D-二聚体D-二聚体临床应用糖化血红蛋白糖化血红蛋白临床应用胱抑素Ccystatinc胱抑素临床应用同型半胱氨酸同型半胱氨酸临床应用