鉴定大口黑鲈遗传性别的分子标记及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113637765A(43)申请公布日2021.11.12(21)申请号202110804834.8(22)申请日2021.07.16(71)申请人中国水产科学研究院珠江水产研究所地址510380广东省广州市荔湾区西朗兴渔路1号(72)发明人李胜杰周家辉杜金星姜鹏雷彩霞(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司44205代理人齐键(51)Int.Cl.C12Q1/6888(2018.01)C12Q1/6879(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表2页(54)发明名称鉴定大口黑鲈遗传性别的分子标记及应用(57)摘要本发明公开了鉴定大口黑鲈遗传性别的分子标记及应用，分子标记的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。本发明从大口黑鲈中筛选获得了性别差异的DNA片段，将基因组序列为SEQIDNO:1的SNP分子标记用于大口黑鲈遗传性别鉴定，并根据差异的片段设计检测引物，从而可以快速、准确的区分大口黑鲈的性别。利用本发明的SNP位点，在生产上可快速对大口黑鲈遗传进行鉴定，在大口黑鲈单性育种方面具有重要的应用价值，同时在定位性别决定基因及性别决定机制研究中也具有重要应用前景。与之前解剖检测或生殖孔观察相比，该技术具有目的性强、准确度高的优点，且操作简单、检测快速，对鱼体伤害少，易于推广。CN113637765ACN113637765A权利要求书1/1页1.与大口黑鲈性别相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于7号染色体的第3356245位至第3356830位之间。2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。3.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述SEQIDNO：1序列自5’端起第226和/或392位碱基为SNP位点，其中第226位碱基为C或者G，第392位碱基为A或者T。4.一种引物，所述引物用于扩增权利要求1～3任一项所述的分子标记。5.根据权利要求4所述的引物，其特征在于，所述引物的序列如下所示：P1：5'‑ATTGTTCCTGCCACTGT‑3'(SEQIDNO:2)；P2：5'‑TGCCACTCTGTAGGTTAAG‑3'(SEQIDNO:3)。6.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求4或5所述的引物。7.权利要求1～3任一项所述的分子标记在鉴定或辅助鉴定大口黑鲈遗传性别或辅助育种中的应用。8.权利要求4～5任一项所述的引物在鉴定或辅助鉴定大口黑鲈遗传性别或辅助育种中的应用。9.权利要求6所述试剂盒在鉴定或辅助鉴定大口黑鲈遗传性别或辅助育种中的应用。10.一种鉴定大口黑鲈遗传性别的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提取待检样品基因组DNA；(2)以提取得到的DNA为模板，利用权利要求4～5任一项所述的引物或权利要求6所述试剂盒进行PCR扩增，得到PCR产物；(3)对PCR扩增产物进行测序，根据测序结果确定样品中的SEQIDNO:1的第226位和/或第392位碱基处的基因型，若第226位碱基处为CC基因型则为雌性，CG基因型则为雄性；若第392位碱基处为AA则为雌性，AT基因型则为雄性。2CN113637765A说明书1/6页鉴定大口黑鲈遗传性别的分子标记及应用技术领域[0001]本发明属于分子生物技术领域，具体涉及鉴定大口黑鲈遗传性别的分子标记及应用。背景技术[0002]大口黑鲈(MicropterusSalmodesL.)，俗名加州鲈，原产于北美洲的淡水湖泊和河流，具有无肌间刺、肉质鲜美、生长迅速、养殖周期短等优点。自1983年引入我国后，历经三十余年的发展，现已成为我国重要的淡水养殖品种。近些年其养殖区域呈现由南向北，由沿海向内陆转移的趋势，其中湖南、湖北、河南等地增加最为明显。但在大口黑鲈养殖产业快速发展的同时，也面临一些产业关键问题。在广东地区，气温较高，大口黑鲈养殖时间较长，养殖周期较短，一般当年(8月龄)便可达到上市规格。但在内陆地区如河南、湖南，气温偏低，养殖周期较长，一般需要次年才可达到上市规格。尽管前期研究发现雌性和雄性大口黑鲈在生长速度上无显著差异，但饲养至6月龄时，卵巢便开始发育，性腺指数维持在2％，饲养至次年3～5月份时性腺指数高达4～8％，导致雌性大口黑鲈生长速度变慢、饵料系数增高。通过性逆转技术培育全雄的大口黑鲈是解决上述问题最为有效的方法之一。具体方法为：使用外源性雄激素将XY雄性大口黑鲈逆转为XY生理雌鱼，再与正常的XY雄鱼进行配对，生产YY超雄大口黑鲈苗种，进而与XX正常雌鱼进行交配，生产XY正常雄鱼。其中XY生理雌鱼的鉴定是上述技术成功的关键。[0003]与大多数鱼类相似，大口黑鲈的性别在生