兔病毒性出血症病毒2型及其在制备灭活疫苗中的应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113736752A(43)申请公布日2021.12.03(21)申请号202111135851.3A61K39/12(2006.01)(22)申请日2021.09.27A61P31/14(2006.01)C12R1/93(2006.01)(66)本国优先权数据202110594937.62021.05.29CN(83)生物保藏信息CGMCCNo.210922020.11.16(71)申请人中牧实业股份有限公司地址100070北京市丰台区南四环西路188号八区16-19号楼(72)发明人向王震王飞肖进侯旭(74)专利代理机构北京惟诚致远知识产权代理事务所(普通合伙)11536代理人王慧凤(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书5页C12N7/00(2006.01)序列表1页附图4页(54)发明名称兔病毒性出血症病毒2型及其在制备灭活疫苗中的应用(57)摘要本发明公开了一种兔病毒性出血症病毒2型及其在制备灭活疫苗中的应用。该毒株保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，其保藏名称为兔病毒性出血症病毒CD2020株，保藏编号为：CGMCCNO.21092。该毒株与目前国内分离兔病毒性出血症病毒序列比对差异较大，其中主要抗原氨基酸的同源性仅88.4％。当前的兔病毒性出血症疫苗对该毒株没有有效的保护作用。因此本发明提出用兔病毒性出血症病毒CD2020株制备油乳灭活疫苗，该疫苗具有良好的免疫效果，免疫兔子后副作用小，安全性高，对外界环境无任何不良影响。CN113736752ACN113736752A权利要求书1/1页1.一株兔病毒性出血症病毒，其特征在于：所述兔病毒性出血症病毒毒株的名称为CD2020，在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CGMCCNo.21092。2.一种兔病毒性出血症2型疫苗，其活性成分为灭活的权利要求1所述的兔病毒性出血症病毒CD2020。3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中还包括药物上可接受的佐剂。4.权利要求1所述的兔病毒性出血症病毒CD2020在制备兔病毒性出血症灭活疫苗中的应用。5.一种兔病毒性出血症2型油乳灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：1)以权利要求1所述兔病毒性出血症病毒病毒株作为种毒，接种50‑60日龄易感非免疫兔，无菌采集接种后16‑48h内发病死亡兔的肝脏，并剔除肝脏的结缔组织；2)将剔除结缔组织的肝脏充分研磨，制备成匀浆；将研磨的匀浆冻融，加入青链霉素，离心，取上清，加入甲醛后摇床灭活，获得灭活组织悬液；3)将步骤2)中的得到的灭活组织悬液与白油佐剂混合，获得兔病毒性出血症病毒2型油乳灭活疫苗，4℃保存备用。6.根据权利要求5所述的兔病毒性出血症2型油乳灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述具体为采用加入5‑10倍体积的灭菌生理盐水进行研磨；所述冻融次数为3次。7.根据权利要求6所述的兔病毒性出血症病毒2型油乳灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述青霉素和链霉素的加入量各为1000IU/ml；所述离心条件为：4500r/min离心30min。8.根据权利要求6所述的兔病毒性出血症病毒2型油乳灭活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述甲醛的灭活终浓度为0.4％；所述摇床灭活的温度为37℃，灭活时间为48h‑72h。9.根据权利要求5‑8中任意一项所述方法制备的兔病毒性出血症病毒2型油乳灭活疫苗。2CN113736752A说明书1/5页兔病毒性出血症病毒2型及其在制备灭活疫苗中的应用技术领域[0001]本发明涉及兽医传染病技术领域，具体而言，涉及一种兔病毒性出血症病毒2型及其在制备灭活疫苗中的应用。背景技术[0002]兔病毒性出血症2型病毒(Rabbithemorrhagicdiseasevirus2，RHDV2)可导致兔群出现兔病毒性出血症。该病具有较高的发病率和病亡率。发病兔群主要呈现出肝脾肿大、肺脏出血等病理变化。[0003]该病毒于2010年首次在法国的一家养殖场被检测到。相较于经典的兔病毒性出血症病毒(Rabbithemorrhagicdiseasevirus，RHDV)，其感染的宿主品种和日龄范围更广，甚至可以导致11日龄幼兔发病且死亡。由于近年来出现的RHDV2病毒能够突破经典RHDV灭活疫苗的免疫保护作用，免疫传统毒株RHDV的疫苗不能产生很好的交叉保护作用，该病毒已在意大利、英国、西班牙、德国、挪威、澳大利亚等国家形成广泛流行。[0004]2020年5月21日，农村农业部畜牧兽医局发布疫情通告称，四川省成都市金堂县有兔场发生兔出血症疫情，造成1500只兔子死亡，经四川省动物疫病预防控制中心确诊为兔出血症2型。这意味着RHDV2型首次在我国发生。还没有疫苗