用于检测食物致敏原的捕获探针集、其制备方法及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113755555A(43)申请公布日2021.12.07(21)申请号202111030675.7G16B50/30(2019.01)(22)申请日2021.09.03(71)申请人浙江工商大学地址310018浙江省杭州市江干区学正街18号申请人武汉明了生物科技有限公司(72)发明人傅玲琳王彦波周瑾茹彭海(74)专利代理机构杭州创造力专利代理事务所(普通合伙)33332代理人陈冲(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)G16B25/20(2019.01)C12N15/11(2006.01)G16B30/10(2019.01)权利要求书1页说明书8页附图1页(54)发明名称用于检测食物致敏原的捕获探针集、其制备方法及应用(57)摘要本发明公开了一种用于检测食物致敏原的捕获探针集、其制备方法及应用，包括以下步骤，根据序列相似性将至少2个致敏原的基因片段进行两两比对；将致敏原基因间含有120bp以上且相似性不低于90％的基因，归为一类；经归类处理后最终得到至少1类目标基因，再对所述目标基因利用clustalw2软件进行多序列比对；利用Perl语言的BioPerl模块，获取每类目标基因的共有序列作为候选探针；每条所述候选探针，依次截取100～130bp长的序列，将CG含量在30％～70％之间且不含有简单重复序列作为单链探针。本发明有益效果：能够实现复杂食品体系中致敏成分和致敏性污染物的高通量检测，具有很高的应用价值。CN113755555ACN113755555A权利要求书1/1页1.一种用于检测食物致敏原的捕获探针集的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，根据序列相似性将至少2个致敏原的基因片段进行两两比对；将致敏原基因间含有120bp以上且相似性不低于90％的基因，归为一类；经归类处理后最终得到至少1类目标基因，再对所述目标基因利用clustalw2软件进行多序列比对；利用Perl语言的BioPerl模块，获取每类目标基因的共有序列作为候选探针；每条所述候选探针，依次截取100～130bp长的序列，将CG含量在30％～70％之间且不含有简单重复序列作为单链探针。2.根据权利要求1所述的用于检测食物致敏原的捕获探针集的制备方法，其特征在于：所述致敏原包括230个物种的763个致敏原的基因片段。3.一种用于高通量测序检测食物致敏原的捕获探针集，其特征在于：包括如权利要求1～2所述制备方法所制得的捕获探针集。4.根据权利要求3所述的用于高通量测序检测食物致敏原的捕获探针集，其特征在于：所述单链探针为7482条。5.根据权利要求3或4所述的用于高通量测序检测食物致敏原的捕获探针集，其特征在于：所述单链探针的核苷酸序列如SEQIDNO:1～SEQIDNO:7482所示。6.根据权利要求5所述的用于高通量测序检测食物致敏原的捕获探针集，其特征在于：所述单链探针的长度为100～130bp。7.根据权利要求3、4或6任一所述的用于高通量测序检测食物致敏原的捕获探针集，其特征在于：所述单链探针的CG含量为30～70％。8.一种用于检测食物致敏原的捕获探针集的应用，其特征在于：包括如权利3～7任一所述捕获探针集，用于高通量测序检测食物致敏原，包括以下步骤，合成生物素标记探针；测序文库构建：对样品DNA进行超声波片段化，片段化的DNA经磁珠纯化，依次进行末端修复、连接样品接头、连接产物纯化、文库扩增、文库纯化后得到待检样品的DNA文库；杂交捕获致敏原序列：对待检样品的DNA文库进行DNA文库变性，之后将变性文库、探针集与亲和链霉素磁珠混合，65℃杂交45min，洗脱去除未结合的DNA片段后获得杂交捕获的致敏原基因片段，通过PCR扩增富集杂交捕获的致敏原基因片段获得捕获DNA文库；所述捕获DNA文库进行上机测序和数据分析。9.根据权利要求8所述的用于检测食物致敏原的捕获探针集的应用，其特征在于：所述PCR扩增为20次循环。2CN113755555A说明书1/8页用于检测食物致敏原的捕获探针集、其制备方法及应用技术领域[0001]本发明涉及基因检测技术和致敏原检测的技术领域，尤其涉及一种用于高通量测序检测食物致敏原的捕获探针集、其制备方法及应用。背景技术[0002]近年来食物过敏是各国政府和民众日益关注的重要公共卫生问题，据调查，世界上高达10％的人口对食物过敏。食物致敏原通常为分子量为5kDa～70kDa的蛋白质，迄今为止，已有数百种蛋白质被国际免疫联合会(IUIS)及世界卫生组织(WHO)认定并命名为致敏原。食物过敏通常会导致患者出现严重的急性全身过敏反应，包括哮喘、荨麻疹、胃肠道痉挛、低血压、休克，甚至危及生命，严重影响着易感人群的身体健康和生活质量。为