用于检测扩增中的扩增阶段的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113823355A(43)申请公布日2021.12.21(21)申请号202110654619.4(22)申请日2021.06.11(30)优先权数据102020116178.62020.06.18DE(71)申请人耶拿分析仪器有限公司地址德国耶拿(72)发明人伊娃·莫勒(74)专利代理机构中原信达知识产权代理有限责任公司11219代理人穆森戚传江(51)Int.Cl.G16B30/00(2019.01)G16B40/00(2019.01)G16B25/20(2019.01)权利要求书2页说明书8页附图5页(54)发明名称用于检测扩增中的扩增阶段的方法(57)摘要本发明涉及一种用于检测扩增中的扩增阶段的方法。该方法用于检测扩增中是否已经发生扩增阶段，其中在定义数目的扩增循环中增加至少一个核酸序列，在每个扩增循环之后查明至少一个核酸序列的信号强度，并且将所查明的强度表示为根据扩增循环的测量点。方法尤其包括以下步骤：从在第一扩增循环之后记录的第一测量点到扩增阶段的所确定的起点计算第一回归线；遍及所有测量点计算第二回归线；借助于第一统计测试关于第一回归线和第二回归线的非相似性而将第一回归线与第二回归线进行比较，其中查明第一应用专用p值。根据第一应用专用p值是否低于或高于定义的极限值，检测出扩增阶段已经发生或尚未发生。CN113823355ACN113823355A权利要求书1/2页1.一种用于检测扩增中是否已经发生扩增阶段的方法，其中在定义数目的扩增循环中增加至少一个核酸序列，在每个扩增循环之后查明所述至少一个核酸序列的信号强度，并且将所查明的强度表示为根据所述扩增循环的测量点，其中，所述方法包括以下步骤：(1)基于所查明的测量点(MP)来确定所述扩增阶段的起点，所述起点标记基本恒定的背景信号与所述扩增阶段的起始之间的过渡，(2)从在第一扩增循环之后记录的第一测量点到所述扩增阶段的所确定的起点计算第一回归线(R1)，(3)遍及所有测量点计算第二回归线(R2)，(4)借助于第一统计测试关于所述第一回归线(R1)和所述第二回归线(R2)的非相似性而将所述第一回归线(R1)与所述第二回归线(R2)进行比较，其中，查明第一应用专用p值(p1)，(5)在所查明的第一应用专用p值(p1)高于定义的极限值的情况下：○检测出尚未发生任何扩增阶段，○中止进一步评估，(6)在所查明的第一应用专用p值(p1)低于定义的极限值的情况下：○检测出扩增阶段已发生，○执行进一步评估。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法具有以下步骤：(7)在第一步骤中使第一模型函数(F1)适应于所有测量点(MP)，所述第一模型函数(F1)包含至少一个S形函数，(8)在第二步骤中使二次模型函数(F2)适应于所有测量点(MP)，(9)借助于第二统计测试关于所述第一模型函数(F1)和所述二次模型函数(F2)的非相似性将所述第一模型函数(F1)与所述二次模型函数(F2)进行比较，其中查明了第二应用专用p值(p2)，(10)在所查明的第二应用专用p值(p2)高于定义的极限值的情况下：○检测出尚未发生任何扩增阶段，(11)在所查明的第二应用专用p值(p2)低于定义的极限值的情况下：○检测出扩增阶段已经发生。3.根据权利要求1至2中至少一项所述的方法，其中，借助于所述第一统计测试，基于所述测量点(MP)对所述第一回归线(R1)和对所述第二回归线(R2)的残差的方差，关于所述第一回归线(R1)和所述第二回归线(R2)的非相似性将所述第一回归线(R1)与所述第二回归线(R2)进行比较。4.根据权利要求1至3中至少一项所述的方法，其中，将f测试用作所述第一统计测试。5.根据权利要求2至4中至少一项所述的方法，其中，借助于所述第二统计测试，基于所述测量点(MP)对所述第一模型函数(F1)和对所述二次模型函数(F2)的残差的方差，关于所述第一模型函数(F1)和所述二次模型函数(F2)的非相似性将所述第一模型函数(F1)与所述二次模型函数(F2)进行比较。2CN113823355A权利要求书2/2页6.根据权利要求2至5中至少一项所述的方法，其中，将f测试用作所述第二统计测试。7.根据权利要求2至6中至少一项所述的方法，其中，将所述第一模型函数(F1)形成为S形函数和线性函数的总和。8.根据权利要求1至7中至少一项所述的方法，其中，将为0.05或为0.01或在0.01与0.05之间的p值优选地定义为所查明的第一应用专用p值(p1)和/或第二应用专用p值(p2)的极限值。9.根据权利要求1至8中至少一项所述的方法，其中，(12)从全部测量点中减去所述第一回归线(R1)作为背景线。10.根据权利要求1至9中至少一项所述的方