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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113846167A(43)申请公布日2021.12.28(21)申请号202111446638.4(22)申请日2021.12.01(71)申请人苏州艾米森生物科技有限公司地址215300江苏省苏州市昆山市玉山镇登云路268号1号楼308室D2(集群登记)(72)发明人张玮李国强(74)专利代理机构北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)11463代理人张金铭(51)Int.Cl.C12Q1/6886(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书12页序列表5页附图1页(54)发明名称一种原发性肝癌的分子标记物检测试剂盒、核酸组合及应用(57)摘要本发明公开了一种原发性肝癌的分子标记物检测试剂盒、核酸组合及应用,涉及肝癌诊断技术领域。本发明通过检测Chr2:25216044‑25216394区域及其反向互补序列中的CpG位点的甲基化水平,可以鉴别目标样本是否为原发性肝癌。上述区域的CpG位点的甲基化对于原发性肝癌的检测或诊断具有较好的灵敏度和特异性,可以用于区分肝癌样本和健康样本,以及肝癌样本和肝硬化样本。本发明为肝癌早筛提供了良好的分子标志物,具有早筛准确度高、无创、方便、安全、快捷、高通量的优势。本发明提供的分子标志物有望提高我国肝细胞癌高风险人群的早诊比例,实现早发现早治疗,降低肝细胞癌发病率与死亡率。CN113846167ACN113846167A权利要求书1/2页1.用于检测原发性肝癌的分子标记物甲基化水平的物质在制备原发性肝癌检测产品中的应用,其特征在于,所述分子标记物为SEQIDNO.1所示序列中至少包含一个CpG位点的核酸分子,或为SEQIDNO.2所示序列中至少包含一个CpG位点的核酸分子。2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述分子标记物为位于如下至少一种CpG岛区域内至少包含一个CpG位点的核酸分子:区域1、区域2、区域3、区域4和区域5;其中,所述区域1选自Chr2:25216048‑25216151正链,所述区域2选自Chr2:25216146‑25216277正链,所述区域3选自Chr2:25216265‑25216351正链,所述区域4选自Chr2:25216390‑25216264负链,所述区域5选自Chr2:25216250‑25216075负链。3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述物质为用于检测原发性肝癌的分子标记物甲基化水平的核酸组合。4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述核酸组合选自如下核酸组合中的至少一种:用于检测所述区域1的核酸组合1、用于检测所述区域2的核酸组合2、用于检测所述区域3的核酸组合3、用于检测所述区域4的核酸组合4和用于检测所述区域5的核酸组合5;所述核酸组合1包括引物组合1,所述核酸组合2包括引物组合2,所述核酸组合3包括引物组合3,所述核酸组合4包括引物组合4,所述核酸组合5包括引物组合5;所述引物组合1的碱基序列与SEQIDNO.7‑8所示的碱基序列具有至少90%的一致性,所述引物组合2的碱基序列与SEQIDNO.10‑11所示的碱基序列具有至少90%的一致性,所述引物组合3的碱基序列与SEQIDNO.13‑14所示的碱基序列具有至少90%的一致性,所述引物组合4的碱基序列与SEQIDNO.16‑17所示的碱基序列具有至少90%的一致性,所述引物组合5的碱基序列与SEQIDNO.19‑20所示的碱基序列具有至少90%的一致性。5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述核酸组合1还包括探针1,所述核酸组合2还包括探针2,所述核酸组合3还包括探针3,所述核酸组合4还包括探针4,所述核酸组合5还包括探针5;所述探针1的碱基序列与SEQIDNO.9所示的碱基序列具有至少90%的一致性,所述探针2的碱基序列与SEQIDNO.12所示的碱基序列具有至少90%的一致性,所述探针3的碱基序列与SEQIDNO.15所示的碱基序列具有至少90%的一致性,所述探针4的碱基序列与SEQIDNO.18所示的碱基序列具有至少90%的一致性,所述探针5的碱基序列与SEQIDNO.21所示的碱基序列具有至少90%的一致性。6.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述原发性肝癌检测产品选自如下产品中的至少一种:试剂、试剂盒、芯片和测序文库。7.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述甲基化水平通过如下至少一种的方法进行检测:甲基化特异性PCR法、测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化特异性微阵列法、甲基化敏感性限制性内切酶法和flapendonuclease法。8.一种试剂,其特征在于,其包括如下至少一种