一种长吻鮠雄性性别特异性分子标记及其扩增引物和遗传性别鉴定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113862379A(43)申请公布日2021.12.31(21)申请号202111232187.4C12Q1/686(2018.01)(22)申请日2021.10.22C12N15/11(2006.01)(71)申请人中国水产科学研究院长江水产研究所地址430000湖北省武汉市东湖新技术开发区武大科技园武大园一路8号申请人湖北省长吻鮠良种场(72)发明人叶欢阮瑞李创举岳华梅宋信华(74)专利代理机构青岛合创知识产权代理事务所(普通合伙)37264代理人王晓晓(51)Int.Cl.C12Q1/6888(2018.01)C12Q1/6879(2018.01)权利要求书1页说明书3页序列表1页附图1页(54)发明名称一种长吻鮠雄性性别特异性分子标记及其扩增引物和遗传性别鉴定方法(57)摘要本发明公开了一种长吻鮠雄性性别特异性分子标记及其扩增引物和遗传性别鉴定方法。所述长吻鮠雄性特异性分子标记的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，其扩增引物的核苷酸序列如SEQIDNo.2和SEQIDNo.3所示。利用扩增引物对长吻鮠基因组DNA进行PCR扩增，产物进行电泳检测，若扩增出特异性条带，则长吻鮠鉴定为雄性个体，若未扩增出特异性目的条带，则为雌性个体，该遗传性别鉴定方法简单、快速、直接，且准确率高，对鱼体伤害小，不受长吻鮠发育时期的限制，解决了长吻鮠发育早期性别鉴定困难的难题，为生产上实现长吻鮠的性别控制育种具有重要意义。CN113862379ACN113862379A权利要求书1/1页1.一种长吻鮠雄性性别特异性分子标记，其特征在于，所述长吻鮠雄性性别特异性分子标记的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。2.权利要求1所述的长吻鮠雄性性别特异性分子标记的扩增引物，其特征在于，所述扩增引物的序列为：F：TAGGTTGATGACCCGCGACTGTCT；R：TGTGGGAATGTTTTAAGAATCCTTAC。3.一种利用权利要求1所述的长吻鮠雄性性别特异性分子标记的遗传性别鉴定方法，其特征在于，所述遗传性别鉴定方法包括以下步骤：（1）提取待测的长吻鮠的基因组DNA；（2）用所述长吻鮠雄性性别特异性分子标记的扩增引物对长吻鮠的基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR产物；（3）对PCR产物进行电泳检测，若扩增出特异性目的条带，待测长吻鮠为雄性个体，若未扩增出特异性目的条带，待测长吻鮠为雌性个体。4.根据权利要求3所述的遗传性别鉴定方法，其特征在于，所述特异性目的条带的大小为501bp。5.根据权利要求3所述的遗传性别鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：基因组DNA50ng；2×EasyTaq®PCRSuperMix10μl；上下游引物各0.4μl；补充ddH2O至20μl。6.根据权利要求5所述的遗传性别鉴定方法，其特征在于，所述基因组DNA的浓度为500ng/μl；所述上下游引物的浓度为10μM20μM。ng/μl~20~7.根据权利要求3所述的遗传性别鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性3min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸20s，34个循环；72℃最后延伸10min。8.根据权利要求3所述的遗传性别鉴定方法，其特征在于，所述基因组DNA采集自长吻鮠的鳍条、血液或组织。9.权利要求1所述的长吻鮠雄性性别特异性分子标记在用于筛选长吻鮠雄性个体中的应用。10.权利要求2所述的长吻鮠雄性性别特异性分子标记的扩增引物在用于制备筛选长吻鮠雄性个体的试剂中的应用。2CN113862379A说明书1/3页一种长吻鮠雄性性别特异性分子标记及其扩增引物和遗传性别鉴定方法技术领域[0001]本发明属于DNA分子标记技术领域，具体涉及一种长吻鮠雄性性别特异性分子标记及其扩增引物和遗传性别鉴定方法。背景技术[0002]长吻鮠（LeiocassislongirostrisGunther）属于、鲶形目、鲿科、鮠属，俗称江团、肥沱，因其吻部较一般鱼长，故而学名是长吻鮠。长吻鮠主要分布于长江干支流和大型通江湖泊中，是一种名贵的淡水经济鱼类，其肉质细嫩、鲜美，无肌间刺且含肉率较高，鳔肥厚，素有“不吃江团，不知鱼味”的美称。由于环境恶化、资源锐减及人工捕捞等多方面因素影响，我国野生长吻鮠资源急剧衰竭，数量急剧减少。[0003]长吻鮠雌雄个体生长存在显著差异，通常雄性个体的生长速度快于雌性，因此，培育长吻鮠雄性养殖群体具有商业化的生产价值。然而，长吻鮠的初次性成熟时间较长，需要3‑5年，且在发育早期无法从形态外观上判断雌雄。传统的长吻鮠性别判断方法是通过观察生殖突，结合挤压腹部，观察是否有卵子或精子流出生殖孔，甚至很多时候需要通过解剖才能判定长吻