一种荧光量子点纳米探针、其制备方法及其检测循环肿瘤细胞的应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113916846A(43)申请公布日2022.01.11(21)申请号202010666311.7B82Y20/00(2011.01)(22)申请日2020.07.10B82Y30/00(2011.01)B82Y40/00(2011.01)(71)申请人中国科学院福建物质结构研究所地址350002福建省福州市杨桥西路155号(72)发明人涂大涛廉纬陈学元周山勇刘韩思远余少桦(74)专利代理机构北京知元同创知识产权代理事务所(普通合伙)11535代理人陈玉平吕少楠(51)Int.Cl.G01N21/64(2006.01)G01N33/569(2006.01)G01N33/574(2006.01)C09K11/02(2006.01)C09K11/88(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图4页(54)发明名称一种荧光量子点纳米探针、其制备方法及其检测循环肿瘤细胞的应用(57)摘要本发明属于生物检测技术领域，公开了一种荧光量子点纳米探针其制备方法及其检测循环肿瘤细胞的应用。所述检测探针包括抗体修饰的水溶性量子点；抗体能够与循环肿瘤细胞表面标记物进行特异性结合，例如抗EpCAM抗体、抗EGFR抗体、抗细胞角蛋白CK‑8、CK‑18和CK‑19抗体、抗肿瘤细胞糖蛋白(TAG)抗体或抗乳球蛋白抗体；更优选为抗EpCAM抗体；水溶性量子点选自近红外二区荧光水溶性无毒量子点。采用抗体修饰的水溶性近红外二区荧光无毒量子点材料作为荧光探针，通过抗原‑抗体特异性识别作用，利用探针荧光强度的变化实现对循环肿瘤细胞数目的检测。CN113916846ACN113916846A权利要求书1/2页1.一种荧光量子点纳米检测探针，其特征在于，所述检测探针包括抗体修饰的水溶性量子点；其中，所述抗体能够与循环肿瘤细胞表面标记物进行特异性结合，优选为抗EpCAM抗体、抗EGFR抗体、抗细胞角蛋白CK-8、CK-18和CK-19抗体、抗肿瘤细胞糖蛋白(TAG)抗体或抗乳球蛋白抗体；更优选为抗EpCAM抗体；所述水溶性量子点选自近红外二区荧光水溶性无毒量子点。2.根据权利要求1所述的检测探针，其特征至于在于，所述近红外二区荧光水溶性无毒量子点选自水溶性的CuInSe2、CuInTe2、AgInSe2、AgInTe2、Ag2S、Ag2Se和Ag2Te量子点中的至少一种，优选为水溶性CuInSe2量子点；优选地，所述荧光水溶性量子点的表面无有机配体；优选地，所述有机配体为油酸、油胺、十二硫醇和三辛胺中的至少一种。3.根据权利要求1或2所述的检测探针，其特征在于，所述荧光量子点纳米检测探针的平均粒径为1-30nm；优选地，所述荧光为808nm激发下的近红外二区(950-1700nm)发射荧光。4.权利要求1-3任一项所述荧光量子点纳米检测探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：利用两亲性分子合成水溶性量子点，加入活化剂活化，然后使用抗体修饰所述水溶性量子点，得到所述荧光量子点纳米检测探针。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述两亲性分子为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DSPE-PEG-COOH)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DSPE-PEG-NH2)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)、巯基丙酸(MPA)、谷胱甘肽(GSH)或叶酸(FA)；优选地，所述两亲性分子为DSPE-PEG-COOH；优选地，所述活化剂为碳二亚胺(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二甲基乙酰胺(DMAC)中的至少一种；优选地，所述活化剂为EDC和NHS。6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，所述水溶性量子点的合成方法为酸洗法、配体交换法或配体连接法；优选地，所述合成方法为配体连接法。优选地，将油溶性量子点加入无水乙醇中进行沉淀，然后加入氯仿和两亲性分子，搅拌使其充分交联，去除有机溶剂，再加入去离子水超声溶解，得到所述水溶性量子点；优选地，所述活性剂活化的过程在pH＝4.5-7.2的第一缓冲溶液中进行；优选地，所述第一缓冲溶液为MES缓冲液、PBS缓冲液、磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液、柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液和磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液中的至少一种；优选地，所述活化过程包括：将所述水溶性量子点和活化剂加入pH＝4.5-7.2的第一缓冲液中，室温搅拌，离心；优选地，所述抗体修饰的方法为静电吸附法或化学配位法；优选为化学配位法。优选地，将活化后的产物加入pH＝7.0-8.0的第二缓冲液中，然后加入所述抗体，混合均匀，低温环境下反应，去离子水洗涤，将洗涤后的产物分散于超纯水中，得到所述荧光量子点纳米检测探针；优选地，所述第二缓冲液为PBS缓冲液