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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113913481A(43)申请公布日2022.01.11(21)申请号202111513425.9(22)申请日2021.12.13(71)申请人中国科学院天津工业生物技术研究所地址300308天津市滨海新区空港经济区西七道32号(72)发明人杨建刚门燕张同孙媛霞马延和(74)专利代理机构北京知文通达知识产权代理事务所(普通合伙)16051代理人欧阳石文(51)Int.Cl.C12P19/02(2006.01)权利要求书2页说明书7页序列表7页附图1页(54)发明名称甘露糖的生物制备方法(57)摘要本发明人通过数据库挖掘筛选Thermotoga菌属的磷酸酶具有较高的活性和特异性的甘露糖6‑磷酸磷酸酶。由此本发明的目的在于筛选得到具有较高的活性和特异性的磷酸酶,通过多酶体系构建,能够高效的用于催化甘露糖6‑磷酸合成甘露糖。CN113913481ACN113913481A权利要求书1/2页1.一种来源于Thermotoga菌属的磷酸酶在催化甘露糖6‑磷酸合成甘露糖中的应用,其特征在于,所述磷酸酶选自:WP_101513072.1、WP_101510852.1、WP_041843828.1、WP_012644897.1、WP_008192576.1、WP_165304640.1、WP_038054438.1、WP_012895992.1、WP_012310432.1、ABQ46309.1;或者通过选自下述核苷酸序列所示的磷酸酶基因通过重组表达获得的磷酸酶:SEQIDNO.11、SEQIDNO.12、SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16、SEQIDNO.17、SEQIDNO.18、SEQIDNO.19、SEQIDNO.20。2.一种用甘露糖6‑磷酸合成甘露糖的方法,其特征在于,以甘露糖6‑磷酸为底物,采用下述磷酸酶进行催化反应,获得甘露糖;所述磷酸酶选自下述之一:WP_101513072.1、WP_101510852.1、WP_041843828.1、WP_012644897.1、WP_008192576.1、WP_165304640.1、WP_038054438.1、WP_012895992.1、WP_012310432.1、ABQ46309.1;或者通过选自下述核苷酸序列所示的磷酸酶基因通过重组表达获得的磷酸酶:SEQIDNO.11、SEQIDNO.12、SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16、SEQIDNO.17、SEQIDNO.18、SEQIDNO.19、SEQIDNO.20。3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,反应体系中含甘露糖6‑磷酸、Mg2+,所述磷酸酶,在磷酸盐缓冲液中于50‑60℃,反应5‑20min。4.一种用淀粉或淀粉衍生物制备甘露糖的方法,其特征在于,通过构建多级酶联催化反应体系,将淀粉或淀粉衍生物合成甘露糖;其中,所述多级酶联催化反应体系包括葡聚糖磷酸化酶,葡萄糖磷酸变位酶,双功能酶葡萄糖磷酸异构酶/甘露糖6‑磷酸异构酶,甘露糖6‑磷酸磷酸酶,异淀粉酶和4‑葡聚糖转移酶的组合;其中所述甘露糖6‑磷酸磷酸酶选自下述之一:WP_101513072.1、WP_101510852.1、WP_041843828.1、WP_012644897.1、WP_008192576.1、WP_165304640.1、WP_038054438.1、WP_012895992.1、WP_012310432.1、ABQ46309.1;或者通过选自下述核苷酸序列所示的磷酸酶基因通过重组表达获得的磷酸酶:SEQIDNO.11、SEQIDNO.12、SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16、SEQIDNO.17、SEQIDNO.18、SEQIDNO.19、SEQIDNO.20。5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,在反应体系中,淀粉的浓度为1‑500g/L,磷酸盐浓度为1‑100mM,葡聚糖磷酸化酶用量为0.1‑1000U/mL,葡萄糖磷酸变位酶用量为0.1‑1000U/mL,双功能酶葡萄糖磷酸异构酶/甘露糖6‑磷酸异构酶为0.1‑1000U/mL,甘露糖6‑磷酸磷酸酶用量为0.1‑1000U/mL。6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,在反应体系中,淀粉的浓度为100g/L,磷酸盐浓度为20mM,葡聚糖磷酸化酶用量为10U/mL,葡萄糖磷酸变位酶用量为10U/mL,双功能酶葡萄糖磷酸异构酶/甘露糖6‑磷酸异构酶用量为10U/mL,甘露糖6‑磷酸磷酸酶10U/mL。7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,反应的条件为