一种双通道脂滴荧光探针、制备方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114149416A(43)申请公布日2022.03.08(21)申请号202111369433.0(22)申请日2021.11.18(71)申请人齐鲁工业大学地址250353山东省济南市长清区大学路3501号(72)发明人张海涛叶鹏曲建波王建勇(74)专利代理机构济南舜源专利事务所有限公司37205代理人李江(51)Int.Cl.C07D405/04(2006.01)C09K11/06(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书10页附图15页(54)发明名称一种双通道脂滴荧光探针、制备方法及其应用(57)摘要本发明提供一种双通道脂滴荧光探针，所述荧光探针的结构式如NAP‑a、NAP‑b、NAP‑c所示；本发明还提供上述荧光探针的制备方法和应用。本发明所述探针是一种对脂滴响应的新的结构单元，实现了对生物体系中脂滴的双通道荧光检测；本发明探针的合成只需要两步就可以完成，且后处理过程简单；本发明实现了脂滴分子探针的选择性快速检测，并且选择性好，抗其他离子干扰能力强。基于其特异性且显著的颜色变化，该试剂可作为显示水溶液中和生物细胞内脂滴分子存在的专一性指示剂，可进行实时定性的目视比色法检测。本发明是一种简单，快速，灵敏的脂滴分子特异性检测探针，在生物分子检测领域具有广阔的应用前景。CN114149416ACN114149416A权利要求书1/1页1.一种双通道脂滴荧光探针，其特征在于：所述荧光探针的结构式如下：。2.一种双通道脂滴荧光探针的制备方法，其特征在于：所述荧光探针的制备方法包括合成中间体、制得探针；所述合成中间体，6‑溴‑2‑(2‑羟乙基)‑1H‑苯并[DE]异喹啉‑1,3(2H)‑二酮与呋喃醛硼酸或噻吩醛硼酸反应得到中间体；所述制得探针，中间体与盐酸羟胺反应得到探针。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述合成中间体，将6‑溴‑2‑(2‑羟乙基)‑1H‑苯并[DE]异喹啉‑1,3(2H)‑二酮与呋喃醛硼酸或噻吩醛硼酸溶解于DMF中，加入碳酸钾作为碱性催化剂，并加入三苯基磷二氯化钯作为催化剂，在氮气环境下，25‑80℃反应12小时，得到粗产物，纯化后得到中间体。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述6‑溴‑2‑(2‑羟乙基)‑1H‑苯并[DE]异喹啉‑1,3(2H)‑二酮与呋喃醛硼酸或噻吩醛硼酸的摩尔比为1：1.9‑2.2；所述6‑溴‑2‑(2‑羟乙基)‑1H‑苯并[DE]异喹啉‑1,3(2H)‑二酮与DMF的质量体积比为38‑42mg:1mL；所述呋喃醛硼酸为5‑甲醛基呋喃‑2‑硼酸；所述噻吩醛硼酸为5‑醛基‑2‑噻吩硼酸、5‑乙酰基‑2‑噻吩硼酸；所述6‑溴‑2‑(2‑羟乙基)‑1H‑苯并[DE]异喹啉‑1,3(2H)‑二酮与碳酸钾的质量比为1.1‑1.2:1；所述6‑溴‑2‑(2‑羟乙基)‑1H‑苯并[DE]异喹啉‑1,3(2H)‑二酮与三苯基磷二氯化钯的质量比为2.1‑2.3:1。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述制得探针，将中间体溶解于无水乙醇中，得到中间体的乙醇溶液，再将盐酸羟胺和碱溶于水中，加入中间体的乙醇溶液中，在60‑100℃下加热反应2‑6h后，过滤得到探针。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述中间体与无水乙醇的质量体积比为26‑30mg：1mL；所述盐酸羟胺与碱的质量比为0.8‑1.7:1；所述盐酸羟胺与水的质量体积比为55‑56mg：1mL；所述中间体与盐酸羟胺的质量比为2.4‑2.7:1。7.一种双通道脂滴荧光探针的应用，其特征在于：所述双通道脂滴荧光探针在脂滴分子检测试剂中的应用。2CN114149416A说明书1/10页一种双通道脂滴荧光探针、制备方法及其应用技术领域[0001]本发明涉及一类用于检测脂滴的荧光探针，以及光谱测试、细胞成像；属于有机小分子荧光探针领域。背景技术[0002]荧光成像提供了一种直观，实时的观察方法，可用于研究复杂的生物结构和生理过程。作为荧光成像的重要载体，有机荧光探针在有机和细胞生理过程的研究中起着重要的作用。许多针对线粒体，溶酶体和囊泡的荧光探针已经商品化，但是很少有用于脂滴成像的荧光探针。而且，市售脂滴荧光探针的成像效果仍然难以令人满意。[0003]脂滴（LDs）是中性脂质的储存场所，广泛存在于酵母，细菌，植物和动物细胞中。长期以来，LD被认为是一种类似糖原的颗粒，并且是储存能量的储库。近年来，一些报告表明，LDs不是简单的能量存储，而是复杂，有活力和动态的多功能细胞器。还发现，许多代谢性疾病，例如脂肪肝，肥胖症，心血管疾病和糖尿病，常常伴有异常的脂质存储。脂滴特异性荧光探针可以直观地观察脂滴在细胞内的含量以及脂滴的