缺氧触发的人工转录因子、转录控制系统及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114249807A(43)申请公布日2022.03.29(21)申请号202111613484.3C12N15/67(2006.01)(22)申请日2021.12.27C12N5/10(2006.01)A61K39/00(2006.01)(66)本国优先权数据A61K35/17(2015.01)202110930268.52021.08.13CNA61P35/00(2006.01)(71)申请人上海鑫湾生物科技有限公司地址201506上海市金山区豪业路518号6幢(72)发明人徐建青张晓燕廖启彬丁相卿(74)专利代理机构北京泛华伟业知识产权代理有限公司11280代理人郭广迅(51)Int.Cl.C07K14/47(2006.01)C12N15/12(2006.01)权利要求书3页说明书12页C12N15/867(2006.01)序列表9页附图6页(54)发明名称缺氧触发的人工转录因子、转录控制系统及其应用(57)摘要本发明提供了一种缺氧触发的人工转录因子。本发明还提供了一种缺氧触发的转录控制系统，所述转录控制系统包含编码HATF的核酸序列和RE。根据本发明所述的缺氧触发的转录控制系统，其中所述缺氧触发的转录控制系统包括上下游连锁的两套转录控制单元，其中所述上游转录控制单元包含用于控制HATF的缺氧触发的转录反应元件和编码HATF的核酸序列；所述下游转录控制单元包含RE和目的基因。本发明的人工转录因子HATF和识别元件RE联合调控目的基因的放大倍数可达百倍，远优于传统人工转录因子(GAL4)及其反应元件(UAS)的10倍上调。CN114249807ACN114249807A权利要求书1/3页1.一种缺氧触发的人工转录因子HATF，所述HATF包含：(1)SEQIDNO:1所示的序列；(2)与SEQIDNO:1所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列；或(3)与SEQIDNO:1所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。2.编码如权利要求1所述的HATF的核酸序列。3.如权利要求1所述的HATF的识别元件RE，所述RE包含选自以下的核心序列：(1)SEQIDNO：2所示的序列，或其互补序列；(2)在严格杂交条件下与SEQIDNO：2所示的序列杂交的序列；(3)与SEQIDNO：2所示的序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98.5％、99％或99.5％序列同一性的序列；或(4)由通过缺失、取代、插入或增加一个或多个核苷酸而衍生化SEQIDNO：2所示的序列获得的序列；优选地，所述RE包含所述核心序列的多个拷贝和最小启动子；更优选地，所述多个拷贝为两个拷贝、三个拷贝、四个拷贝、五个拷贝、六个拷贝、七个拷贝、八个拷贝、九个拷贝或十个拷贝；进一步优选地，所述识别元件RE包含所述核心序列的五个或六个拷贝和最小启动子；更进一步优选地，所述RE包含选自以下的序列：(1)SEQIDNO：3所示的序列，或其互补序列；(2)在严格杂交条件下与SEQIDNO：3所示的序列杂交的序列；(3)与SEQIDNO：3所示的序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98.5％、99％或99.5％序列同一性的序列；或(4)由通过缺失、取代、插入或增加一个或多个核苷酸而衍生化SEQIDNO：3所示的序列获得的序列；最优选地，所述RE如SEQIDNO：3所示。4.一种缺氧触发的转录控制系统，所述转录控制系统包含如权利要求2所述的核酸序列和如权利要求3所述的RE；优选地，所述缺氧触发的转录控制系统包括上下游连锁的两套转录控制单元，其中所述上游转录控制单元包含用于控制HATF的缺氧触发的转录反应元件HRTE和编码HATF的核酸序列；所述下游转录控制单元包含RE和目的基因GOI。5.根据权利要求4所述的缺氧触发的转录控制系统，其中，所述上下游连锁的转录控制单元非线性串联，位于两个载体；优选地，所述转录控制系统具有如下式中任一项所示的组合形式：HATF‑HRTE和RE‑GOI；HATF‑HRTE和GOI‑RE；HRTE‑HATF和GOI‑RE或HRTE‑HATF和RE‑GOI；2CN114249807A权利要求书2/3页或所述上下游连锁的转录控制单元线性串联，位于同一载体；优选地，所述转录控制系统具有如下式中任一项所示的组合形式：HATF‑HRTE‑RE‑GOI；HATF‑HRTE‑GOI‑RE；HRTE‑HRE‑GOI；HRTE‑