一种用于检测降钙素原新型免疫比浊试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114280288A(43)申请公布日2022.04.05(21)申请号202111581897.8(22)申请日2021.12.22(71)申请人安徽环球基因科技有限公司地址239000安徽省滁州市经济技术开发区祈福寺西路69号(72)发明人缪连军张磊门静涛雍金贵郁春云赵杰沈健周堃唐爱阳徐庆阳(74)专利代理机构合肥正则元起专利代理事务所(普通合伙)34160代理人王艳君(51)Int.Cl.G01N33/539(2006.01)G01N33/543(2006.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图1页(54)发明名称一种用于检测降钙素原新型免疫比浊试剂盒(57)摘要本发明公开了一种用于检测降钙素原新型免疫比浊试剂盒，属于检测试剂技术领域，R2试剂中的CE510封闭剂可以占据胶乳微球上的空白位点，避免胶乳微球发生凝集现象；在R1试剂中加入一定浓度的茶皂素，由于茶皂素是一种更强的表面活性剂，还具有溶解脂质的作用，既可以消除不同样本检测试剂不同程度的干扰，也不会干扰单抗与目标物的结合，从而保证检测结果的可信度。试剂盒采用单克隆抗体，可以减小试剂盒的批间差。通过胶乳增强免疫比浊检测试验得知，胶乳增强免疫比浊检测试剂盒中使用标记组合型单抗与金标准罗氏电化学发光检测值高度一致，准确性远高于现有的标记多克隆抗体的试剂盒。CN114280288ACN114280288A权利要求书1/2页1.一种用于检测降钙素原新型免疫比浊试剂盒，其特征在于，包括降钙素原标准品、R1试剂和R2试剂，R1试剂和R2试剂按配比计包括如下组分：R1试剂：0.4‑0.6wt％缓冲剂、0.08‑0.12wt％牛血清蛋白、0.8‑1.2wt％碱金属盐、0.08‑0.12wt％D‑海藻糖、0.5‑3.0wt％促凝剂、0.1‑1.0wt％茶皂素、0.08‑0.12wt％叠氮钠，余量为去离子水；R2试剂：48‑52mmol/L缓冲剂、0.08‑0.12vol％CE510封闭剂、0.8‑1.2wt％碱金属盐、0.08‑0.12wt％D‑海藻糖、0.08‑0.12wt％叠氮钠、0.08‑0.12wt％鼠抗人降钙素原单克隆组合型抗体偶联的聚苯乙烯胶乳微球，余量为去离子水。2.根据权利要求1所述的一种用于检测降钙素原新型免疫比浊试剂盒，其特征在于，R1试剂的pH值为5.1‑7.4，促凝剂为聚乙二醇。3.根据权利要求1所述的一种用于检测降钙素原新型免疫比浊试剂盒，其特征在于，R2试剂的pH值为7.4‑7.8。4.根据权利要求1所述的一种用于检测降钙素原新型免疫比浊试剂盒，其特征在于，R1试剂和R2试剂中的缓冲剂为2‑(N‑吗啉)乙磺酸一水合物‑NaOH、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸‑HCl、三羟甲基氨基甲烷、N‑2‑羟乙基哌嗪‑N‑3丙磺酸、3‑(N‑吗啡代)丙烷磺酸、三乙醇胺、二乙醇胺、2‑甲基‑2‑氨基‑1丙醇，N‑双(2‑羟乙基)‑2‑氨基乙磺酸、(环己胺)‑1‑丙磺酸、(环己胺)‑1‑乙磺酸、2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸、哌嗪‑N，N‑双(2‑乙磺酸)、哌嗪‑N，N‑双(2‑羟基乙烷磺酸)、三(羟甲基)甲基‑3‑氨基丙烷磺酸、三(羟甲基)甲基‑2‑氨基磺酸中的一种或几种按任意比混合。5.根据权利要求1所述的一种用于检测降钙素原新型免疫比浊试剂盒，其特征在于，碱金属盐为NaCl、KCl、Na2HPO3、NaH2PO3、K2HPO3、KH2PO3、Na2CO3、NaHCO3和K2CO3中的一种或几种按任意比混合。6.根据权利要求1所述的一种用于检测降钙素原新型免疫比浊试剂盒，其特征在于，鼠抗人降钙素原单克隆组合型抗体通过单克隆抗体PCT‑124E7、单克隆抗体PCT‑11B8和单克隆抗体PCT‑37G5按1：1：1的质量比混合制得。7.根据权利要求1所述的一种用于检测降钙素原新型免疫比浊试剂盒，其特征在于，鼠抗人降钙素原单克隆组合型抗体偶联的聚苯乙烯胶乳微球通过如下步骤制备：将表面含羧基的聚苯乙烯乳胶微球用MES缓冲液混合，吹打均匀后加入EDAC/NHS活化，在25℃条件下反应15‑20min，离心30min后将沉淀用pH值为7.6且浓度为25mmol/L的4‑羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液重悬得到悬液，超声处理得到活化的表面含羧基的聚苯乙烯乳胶微球；向超声处理后的悬液中加入鼠抗人降钙素原单克隆组合型抗体，25℃恒温摇床中反应1‑2h，然后加入浓度为10g/L的BSA甘氨酸缓冲液，在25℃条件下反应40min，在离心力为13000g的条件下离心30min，将沉淀用R2缓冲液重悬2次，离心取沉淀保存在超声处理5min的R2缓冲液中，得到鼠抗人降钙素原单克隆组合型抗体偶联的聚苯乙烯胶乳微球。8