检测血浆中tRF水平的胃癌分子标记物以及应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114875145A(43)申请公布日2022.08.09(21)申请号202210400599.2(22)申请日2022.04.16(71)申请人宁波大学地址315211浙江省宁波市江北区风华路818号(72)发明人郭俊明宋雪梅俞秀冲翁秋燕张双双谢瑶瑶(74)专利代理机构宁波诚源专利事务所有限公司33102专利代理师徐雪波叶桂萍(51)Int.Cl.C12Q1/6886(2018.01)C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表1页附图7页(54)发明名称检测血浆中tRF水平的胃癌分子标记物以及应用(57)摘要本发明涉及一种检测血浆中tRF水平的胃癌分子标记物以及应用，其特征在于：包括用于检测血浆样本中tRF‑20‑V29K9UV3和tRF‑27‑87R8WP9N1E5的其中一个或是二个联合的试剂，与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明的试剂盒将tRF‑20‑V29K9UV3和tRF‑27‑87R8WP9N1E5单独或是联合作为早期胃癌辅助诊断的标志物，可根据检测目的选择相应的检测靶标进行绝对定量检测，仅需少量样品即可快速、准确地完成靶标分子的绝对定量检测，及胃早癌的筛查与鉴别，灵敏度高，准确率高，检测快速。CN114875145ACN114875145A权利要求书1/1页1.一种用于胃癌辅助诊断的检测试剂盒，其特征在于：包括用于检测血浆样本中tRF‑20‑V29K9UV3、tRF‑27‑87R8WP9N1E5的其中一个或是二个联合的试剂，其中：tRF‑20‑V29K9UV3的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述tRF‑20‑V29K9UV3在胃早癌患者血浆中显著上调；所述引物为：F1：5'‑CCGTTGGTAGGATGGGGTGT‑3'；R1：5'‑GGTACCTCCTCTCTTCTCTACT‑3'；tRF‑27‑87R8WP9N1E5的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，所述tRF‑27‑87R8WP9N1E5在胃早癌患者血浆中显著上调；F2：5'‑GGTCTCTGGTGGTCTAGTGGT‑3'；R2：5'‑GGTACCTCCTCTCTTCTCTACT‑3'。2.根据权利要求1所述的用于胃癌辅助诊断的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括有tRF‑20‑V29K9UV3和tRF‑27‑87R8WP9N1E5的逆转录引物序列，其中，tRF‑20‑V29K9UV3的逆转录序列如SEQIDNo.3所示：5'‑GCAGACGAGGGTACCTCCTCTCTTCTCTACTCGTGTCCTACCCTCGTCTGCACCTAT‑3'；tRF‑27‑87R8WP9N1E5的逆转录序列如SEQIDNo.4所示：5'‑GCAGACGAGGGTACCTCCTCTCTTCTCTACTCGTGTCCTACCCTCGTCTGCGAATCC‑3'。3.根据权利要求1或2所述的用于胃癌辅助诊断的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括有tRF‑20‑V29K9UV3和tRF‑27‑87R8WP9N1E5的探针引物序列，其中，tRF‑20‑V29K9UV3的探针引物序列如SEQIDNo.5所示：5'‑FAM‑TGTCCTACCCTCGTCTGCACCTAT‑TAMRA‑3'；tRF‑27‑87R8WP9N1E5的探针引物序列如SEQIDNo.6所示：5'‑FAM‑AGGATTCGCAGACGAGGGTAGGACA‑TAMRA‑3'。4.一种检测血浆中tRF分子标记物的方法，其特征在于：所述tRF分子标记物为权利要求1中所述的tRF‑20‑V29K9UV3和tRF‑27‑87R8WP9N1E5，所述的方法包括如下步骤：(1)采集血液，提取血浆中的总RNA；(2)将总RNA逆转录成cDNA；(3)利用tRF‑20‑V29K9UV3和tRF‑27‑87R8WP9N1E5的特异性扩增引物对步骤(2)的cDNA溶液进行荧光定量PCR检测，反应结束后检测荧光信号值并设定Y值；(4)获得每个样品的Cq值，也就是y值，并按所检测tRF对应的标准曲线计算出相应的拷贝数x后，将按照400×10x/3计算每个样品对应1mL血浆时的拷贝数，并进行早期胃癌患者1mL血浆内tRF‑20‑V29K9UV3和tRF‑27‑87R8WP9N1E5拷贝数的统计学分析。2CN114875145A说明书1/6页检测血浆中tRF水平的胃癌分子标记物以及应用技术领域[0001]本发明涉及一种血浆中转运RNA衍生片段的检测方法，尤其涉及一种血浆中tRF胃癌分子标记物的检测及其应用。背景技术[0002]根据世界卫生组织2021年报告的流行病学统计数据，2020年世界