两种菌协同降解多环芳烃的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102491533A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102491533A(43)申请公布日2012.06.13(21)申请号201110411724.1(22)申请日2011.12.12(71)申请人沈阳化工大学地址110142辽宁省沈阳市经济技术开发区11号(72)发明人李盼盼臧淑艳叶小贝袁博侯雪敏尹利(74)专利代理机构沈阳技联专利代理有限公司21205代理人张志刚(51)Int.Cl.C02F3/34(2006.01)C12N1/20(2006.01)C02F101/32(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书33页页附图附图11页(54)发明名称两种菌协同降解多环芳烃的方法(57)摘要两种菌协同降解多环芳烃的方法，涉及一种多环芳烃的降解方法，细菌培养基Ⅰ：牛肉膏5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，去离子水1L，pH7.2；真菌培养基Ⅰ：把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，用纱布过滤，补足水分；在滤液中加入蔗糖20克补足水分至1000毫升，分装，灭菌，备用；平pH自然；在150ml三角瓶中加入30ml培养液，灭菌冷却至室温后培养；再将PAHs与菌种混合培养：该方法是将一种真菌和一种细菌同时投放到含有多环芳烃的废水中，为多环芳烃的降解提供了一种更有效的方法，该方法降解效率高、降解程度大。CN1024953ACN102491533A权利要求书1/1页1.两种菌协同降解多环芳烃的方法，其特征在于，该方法包括如下过程：a.菌类的培养：包括菌种的分离、鉴定和菌种的培养，其菌种的培养为：细菌培养基Ⅰ：牛肉膏5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，去离子水1L，pH7.2；如果灌制斜面，则加入2%琼脂；细菌培养基Ⅱ：MgSO4·7H2O0.2g，CaCl2·2H2O0.01g，FeSO4·7H2O0.01g，KH2PO40.4g，Na2HPO4·12H2O0.6g，MnSO4·H2O0.02g,NH4NO31g，葡萄糖0.5g，去离子水1L,pH7.0～7.6；真菌培养基Ⅰ：把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，用纱布过滤，补足水分；在滤液中加入蔗糖20克补足水分至1000毫升，分装，灭菌，备用；如果灌制斜面，则加入2%琼脂；PH自然；真菌培养基Ⅱ：(g/L):NH4NO3,1;MgSO4·7H2O,0.2;CaCl2·2H2O,0.01;FeSO4·7H2O,0.01;KH2PO4,0.4;Na2HPO4·12H2O,0.6;MnSO4·H2O,0.02;葡萄糖,0.5；在150ml三角瓶中加入30ml培养液，在压力为1.01325×105Pa灭菌30min，冷却至室温后，将保存于斜面的不同菌种分别接至上述细菌培养基Ⅰ和真菌培养基Ⅰ，培养12-20h后，在无菌室分别对应地转接到细菌培养基Ⅱ样品中和真菌培养基Ⅱ样品中；再将PAHs与菌种混合培养：对降解菌制备完成之后在进行实验之前将降解的多环芳烃和菌类混合4周时间，增加菌对这种多环芳烃毒性的耐受度；b.降解实验：实验设置三个方案，目的是做一比较来验证结果的正确性，方案一：将要降解某一个多环芳烃作为唯一的碳源，加入培养好的真菌，调节适度的pH值，入摇床适宜条件下降解培养，在0,2,4,6,8,10d分别取样；方案二：将要降解某一个多环芳烃作为唯一的碳源，加入培养好的细菌，调节pH值，入摇床降解培养，在0,2,4,6,8,10d分别取样；方案三：除了加入的是50%真菌和50%的细菌混合菌外，其他处理方法同上；c.结果处理：对上述的样品首先二氯甲烷萃取处理，紫外分光光度计进行测定。2CN102491533A说明书1/3页两种菌协同降解多环芳烃的方法技术领域[0001]本发明涉及一种多环芳烃的降解方法，特别是涉及两种菌协同降解多环芳烃的方法。背景技术[0002]多环芳烃（PAHs）是环境中普遍存在的一类有机污染物，是指两个或两个以上苯环以线状、角状或簇状排列的稠环化合物，是有机物不完全燃烧或高温裂解的副产物。由于其在环境中的半衰期较长和致癌、致畸、致突变的性质而受到人们的重视。这类化合物具有极低的水溶性，在环境中很难消除，因此，美国环保局在20世纪80年代初把16种未带分支的PAHs确定为环境中的优先污染物。因此，多环芳烃的降解对生态环境和人类的健康显得尤为重要。[0003]环境中污染的PAHs主要是通过细菌、真菌以及藻类等微生物的作用转变为无机物。迄今为止，已经发现的能够降解烃类的微生物有70多个属、200余种,其中细菌和真菌占绝大多数。自然界中存在的许多细菌、真菌及藻类都具有降解多环芳烃的能力。但是尽管目前已有不少通过细菌或真菌来降解多环芳烃的应用实例，但是他们的处理效