三唑仑检测试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102539765A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102539765A(43)申请公布日2012.07.04(21)申请号201010610904.8(22)申请日2010.12.29(71)申请人北京宝瑞源科技孵化有限公司地址102433北京市房山区窦大路九区30号(72)发明人陈立柱李峰杨利(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/543(2006.01)G01N33/532(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书55页页附图附图11页(54)发明名称三唑仑检测试剂盒及其制备方法(57)摘要一种用于检测三唑仑的检测试剂盒，该试剂盒包括样品垫(1)、胶体金垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸样垫(4)和PVC支撑板(5)，在PVC支撑板上依次连续粘附有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸样垫，所述胶体金垫为胶体金标记的三唑仑单克隆抗体聚酯膜，所述硝酸纤维素膜上依次包被了三唑仑-牛血清蛋白偶联抗原作为检测线(T线)，羊抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线(C线)。本发明采用胶体金免疫层析技术制备三唑仑检测试剂盒，用于检测样本中可能存在的三唑仑，本试剂盒制备方法简单，具有使用方便、反应迅速、经济实用等特点。CN10253976ACN102539765A权利要求书1/1页1.一种三唑仑检测试剂盒及其制备方法，其特征在于由样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸样垫和PVC支撑板组成，样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸样垫紧密粘附在PVC支撑板上；所述样品垫为玻璃纤维；所述胶体金垫为胶体金标记的三唑仑单克隆抗体聚酯膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被了三唑仑-牛血清白蛋白偶联抗原作为检测线(T线)，羊抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线(C线)；所述吸样垫为吸水纸。2.一种权利要求1所述的三唑仑检测试剂盒及其制备方法，其特征在于所述的三唑仑单克隆抗体由三唑仑-牛血清蛋白偶联抗原作为免疫原免疫BALB/C小鼠获得。3.一种权利要求1所述的三唑仑检测试剂盒及其制备方法，其特征在于所述的胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂枸橼酸三钠作用下制成大小为20-40nm的胶体金颗粒。4.一种权利要求1所述的三唑仑检测试剂盒及其制备方法，其特征在于所述的胶体金垫的制备方法为：取颗粒大小为20-40nm的胶体金溶液，用0.1mol/LK2CO3将胶体金溶液的pH值调至7.0-9.0，室温放置30分钟；在上述溶液中加入三唑仑单克隆抗体，使三唑仑单克隆抗体的浓度为10-60μg/ml胶体金，混合均匀后，室温放置30分钟；加入10％的牛血清蛋白(BSA)溶液使其浓度为10-60μl/ml，混合均匀，室温放置30分钟；12000转离心30分钟，仔细吸取上清液，弃去，剩余的沉淀用初始胶体金体积的胶体金复溶液溶解；12000转离心30分钟，仔细吸取上清液，弃去，剩余的沉淀用30％-100％初始胶体金体积的胶体金复溶液溶解，得到三唑仑单克隆抗体-胶体金标记物；将三唑仑单克隆抗体-胶体金标记物按1mL铺40-70cm2聚酯膜的比例均匀铺在聚酯膜上，再置干燥间，在温度38℃，湿度小于30％的条件下干燥24±2小时，制成胶体金垫。5.一种权利要求1及权利要求5所述的三唑仑检测试剂盒及其制备方法，其特征在于所述的胶体金复溶液为含0.01-0.1％的Tris，1.0-3.0％的蔗糖、0.1-1.0％的BSA的0.02MpH7.0-9.0的磷酸盐缓冲溶液。6.一种权利要求1所述的三唑仑检测试剂盒及其制备方法，其特征在于所述的硝酸纤维素膜上的两条线的包被方法为：设定划膜仪涂覆参数1μL/cm，分别用微量进样器取浓度为0.5-5.0mg/ml的三唑仑-牛血清蛋白偶联抗原、取浓度为0.5-5.0mg/ml羊抗鼠IgG多克隆抗体，按顺序接到划膜仪的A、B管道接口。将贴有硝酸纤维素膜的PVC板置于划膜仪的往复运动平台上，开启划膜仪，在硝酸纤维素膜上涂覆三唑仑-牛血清蛋白偶联抗原(T线)、羊抗鼠IgG多克隆抗体(C线)。划线后于温度38℃的烘箱中干燥24±2小时，保存，备用。2CN102539765A说明书1/5页三唑仑检测试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及生物学免疫方法的测定技术领域，特别是涉及一种利用胶体金免疫层技术制作的一种三唑仑检测试剂盒及其制备方法。背景技术[0002]三唑仑又名海乐神、酣乐欣，淡蓝色片，是一种强烈的麻醉药品，口服后可以迅速使人昏迷晕倒，故俗称迷药、蒙汗药、迷魂药。可以伴随酒精类共同服用，也可溶于水及各种饮料中。见效迅速，药效比普通安定强45-100倍。三唑仑是当前国内最常用的苯二氮卓类药物之一，常被犯罪分子用于麻醉抢劫和麻醉凶杀。