HMGB1检测试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109030817A(43)申请公布日2018.12.18(21)申请号201810721943.1(22)申请日2018.07.04(71)申请人长沙都正医学检验有限责任公司地址410205湖南省长沙市长沙高新开发区麓天路28号金瑞麓谷科技园C8-10栋401房(72)发明人郭凡财赵洪斌郭飞余鹏李晓晖欧阳冬生(74)专利代理机构广州华进联合专利商标代理有限公司44224代理人黄晓庆(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)G01N33/558(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图1页(54)发明名称HMGB1检测试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明涉及一种HMGB1检测试剂盒及其制备方法，其中，HMGB1检测试剂盒包括：试剂1和试剂2；所述试剂1包括HMGB1抗体标记的胶乳微球、助悬剂、牛血清白蛋白、第一缓冲液；所述试剂2包括氯化钠、分散剂、表面活性剂、第二缓冲液。该HMGB1检测试剂盒是一种基于胶乳增强免疫比浊法检测HMGB1的试剂盒，使用时通过在均相反应体系中进行抗原、抗体反应，当抗原与抗体结合后，直接测定反应溶液的吸光度值来反应被测抗原的浓度，检测速度快、成本低、省时省力，且稳定性和重复性好，能较真实地反映被测物质的含量。CN109030817ACN109030817A权利要求书1/1页1.一种HMGB1检测试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2；所述试剂1包括HMGB1抗体标记的胶乳微球、助悬剂、牛血清白蛋白和第一缓冲液；所述试剂2包括氯化钠、分散剂、表面活性剂和第二缓冲液。2.根据权利要求1所述的HMGB1检测试剂盒，其特征在于，所述试剂1包括以下终浓度的组分：60μg/mL～120μg/mLHMGB1抗体、0.1v/v％～0.15v/v％胶乳微球、30g/L～60g/L助悬剂、5g/L～20g/L牛血清白蛋白和40mM/mL～60mM/mL第一缓冲液，所述试剂1的pH值为7～8。3.根据权利要求1所述的HMGB1检测试剂盒，其特征在于，所述胶乳微球为表面活化的聚苯乙烯胶乳微球，所述聚苯乙烯胶乳微球的表面活化基团为羧基，所述胶乳微球的颗粒直径为20nm～50nm。4.根据权利要求1所述的HMGB1检测试剂盒，其特征在于，所述助悬剂选自海藻糖、葡萄糖、乳糖和蔗糖中的至少一种。5.根据权利要求1所述的HMGB1检测试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液选自PB缓冲液、MES缓冲液、Tris-HCl缓冲液和甘氨酸缓冲液中的至少一种。6.根据权利要求1～5任一所述的HMGB1检测试剂盒，其特征在于，所述试剂2包括以下终浓度的组分：5g/L～9g/L氯化钠、5g/L～10g/L分散剂、0.2g/L～0.8g/L表面活性剂和40mM/mL～60mM/mL第二缓冲液，所述试剂2的pH值为7～8。7.根据权利要求6所述的HMGB1检测试剂盒，其特征在于，所述试剂1和所述试剂2的用量体积比为1:(1～3)。8.权利要求1～7任一所述的HMGB1检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括所述试剂1的制备步骤和所述试剂2的制备步骤；其中，所述试剂1的制备步骤包括以下步骤：将所述助悬剂、所述牛血清白蛋白、所述第一缓冲液和所述HMGB1抗体标记的胶乳微球混合，并超声悬浮，得超声悬浮液；将所述超声悬浮液进行紫外灭菌、无菌封装，得到所述试剂1；所述试剂2的制备步骤：将所述试剂2的各组分混合均匀，得到所述试剂2。9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述试剂1的制备步骤还包括所述HMGB1抗体标记的胶乳微球的制备，包括如下步骤：取胶乳微球加入到缓冲液中，然后加入表面活性剂和活化剂，活化所述胶乳微球，制成混合液A；所述活化剂为羧基活化剂或氨基活化剂；往所述混合液A中加入HMGB1抗体，进行偶联标记反应，制成含HMGB1抗体标记的胶乳微球的溶液B；往所述溶液B中加入封闭液，封闭反应完成后，进行离心，所得沉淀即为所述HMGB1抗体标记的胶乳微球。10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述试剂1的制备方法中的所述表面活性剂选自TritonX-100、吐温-20和脂肪酸甲酯磺酸钠中的至少一种。2CN109030817A说明书1/8页HMGB1检测试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及医学检测技术领域，特别是涉及一种HMGB1检测试剂盒及其制备方法。背景技术[0002]高迁移率族蛋白1(highmobilitygroupprotein，HMGB1)是存在于真核细胞核内的非组蛋白染色体结合蛋白，因其在聚丙烯酞胺凝胶电泳(PAGE)中迁移速度快而得名。HMGB1普遍存在于哺乳动物组织细胞中，是具有重要意义的炎症因子。HMGB1作为晚期炎症因