一种心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102788880A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102788880A(43)申请公布日2012.11.21(21)申请号201210291110.9(22)申请日2012.08.16(71)申请人北京恩济和生物科技有限公司地址100083北京市海淀区学清路16号学知轩1801室(72)发明人谢兵(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书33页页(54)发明名称一种心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法(57)摘要一种心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括：试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；试剂R2：缓冲液、结合有心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长500nm处吸光度变化的速度，从而测算出心型脂肪酸结合蛋白的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。CN10278ACN102788880A权利要求书1/1页1.一种心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其组成为：试剂R1、试剂R2，其中：a、试剂R1包括：200-220mmol/LTris缓冲液、5-10mmol/L聚乙二醇、1-5mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白；b、试剂R2：200-220mmol/LTris缓冲液、结合有心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、1-5mmol/L吐温-20、0.5-3mmol/L叠氮钠、1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、1-5mmol/L牛血清白蛋白。2.权利要求1的试剂盒，其特征在于：试剂R2中的心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的乳胶粒子的制备方法为：10.5mg/ml的心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体与10%的乳胶颗粒（直径50-100nm），加入到200-220mmol/LTris缓冲液中，震荡反应4小时，离心去上清，再用200-220mmol/LTris缓冲液稀释至0.5%，并加入0.1-0.3mmol/L叠氮钠。3.上述试剂盒的制备和操作方法，主要步骤为：（a）按下列比例配制好试剂：试剂R1：Tris缓冲液200-220mmol/L聚乙二醇5-10mmol/L叠氮钠1-5mmol/L乙二胺四乙酸钠1-5mmol/L牛血清白蛋白1-5mmol/L试剂R2：Tris缓冲液200-220mmol/L结合有心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的乳胶粒子3.5-5%（v/v）吐温-201-5mmol/L叠氮钠0.5-3mmol/L乙二胺四乙酸钠1-5mmol/L牛血清白蛋白1-5mmol/L（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；（d）根据吸光度变化值计算出样本中心型脂肪酸结合蛋白的浓度。4.权利要求3的方法，其特征在于，被测样品与试剂比例应控制在1：15到1：25之间。5.权利要求3的方法，其特征在于，反应温度为37（±1）℃。6.权利要求3的方法，其特征在于，反应时间为8-12分钟。7.权利要求3的方法，其特征在于，用半/全自动生化分析仪检测的主波长为500nm，副波长为700nm。2CN102788880A说明书1/3页一种心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒。背景技术[0002]心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）是分子量为l4～15kd的可溶性胞浆蛋白,主要分布于心肌组织中，约占心肌细胞可溶性蛋白的4％～8％，在骨骼肌、肾小管、脑组织、乳腺、胎盘组织中也有少量分布。H-FABP是由132个氨基酸残基组成酸性蛋白质，其等电点(PI)为5，其基因定位于1号染色体。[0003]在正常情况下，长链脂肪酸是心肌细胞的主要能量来源。H—FABP作为脂肪酸的载体蛋白与心肌内的长链脂肪酸相结合，将其从细胞质膜向线粒体运输，从而进入能量代谢体系中氧化分解，生成三磷酸腺苷，为心肌收缩提供能量。此外，还参与旁路信号传导：如通过脂肪酸信号易位至过氧化物酶体增生物激活受体间接调控基因表达，并被认为当心肌缺血造成局部长链脂肪酸聚集时，H-FABP对心肌有保护作用。[0004]生理条件下，血浆和尿中不含H-FABP或含量很少，正常人血液中可以检测到低浓度的H-FABP。性别、年龄和昼夜节律均可引起H-FABP含量的变化如男性肌肉比例高于女性，因此男性血浆H-FABP浓度高于女性；血中H-FABP主要由肾脏清除，血浆H-FABP浓度随年龄升高。[0005]H-FAB