分泌牛白细胞介素-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105483090A(43)申请公布日2016.04.13(21)申请号201510886183.6G01N33/577(2006.01)(22)申请日2015.12.04(83)生物保藏信息CCTCCNO：C20152132015.11.21CCTCCNO：C20152122015.11.21(71)申请人扬州大学地址225009江苏省扬州市大学南路88号(72)发明人焦新安陈祥徐正中胡婷孟闯闵晶晶夏爱鸿潘志明孙林(74)专利代理机构北京华夏正合知识产权代理事务所(普通合伙)11017代理人韩登营(51)Int.Cl.C12N5/20(2006.01)C07K16/24(2006.01)权利要求书2页说明书17页附图2页(54)发明名称分泌牛白细胞介素-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体及其应用(57)摘要本发明提供了分泌牛白细胞介素-2(IL-2)单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D8和6D7。本发明的分泌牛IL-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体MAb3D8和MAb6D7具有效价高、特异性好、与天然IL-2抗原亲和力强的优势，基于此建立的牛IL-2双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)和流式细胞术(FCM)检测试剂盒，具有较好的灵敏度和特异性，可以用作重组表达牛IL-2的检测、对离体组织进行检测、表位鉴定等非诊断目的研究。CN105483090ACN105483090A权利要求书1/2页1.一种分泌牛IL-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中，所述杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株3D8或其传代细胞株，所述杂交瘤细胞株3D8,保藏名称为杂交瘤细胞株3D8，保藏号为CCTCCNO：C2015213；保藏于中国典型培养物保藏中心；保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2015年11月21日。2.一种根据权利要求1所述的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生的牛IL-2单克隆抗体MAb3D8。3.一种牛IL-2的双抗体夹心ELISA检测试剂盒，所述ELISA检测试剂盒包括支持介质、捕获抗体、检测抗体、阴性对照和阳性对照，其中，所述捕获抗体为所述的杂交瘤细胞3D8株或其传代细胞株分泌产生的牛IL-2单克隆抗体MAb3D8，所述检测抗体为生物素标记牛IL-2单克隆抗体，所述牛IL-2单克隆抗体MAb3D8与生物素标记牛IL-2单克隆抗体能同时与牛IL-2发生抗原抗体结合反应；所述捕获抗体包被在支持介质中或所述捕获抗体与支持介质分别放置。4.根据权利要求3所述ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记牛IL-2单克隆抗体中的牛IL-2单克隆抗体为由杂交瘤细胞株6D7或其传代细胞株分泌产生的单克隆抗体MAb6D7。5.根据权利要求3-4任一项所述ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括下列试剂：1)亲和素-辣根过氧化物酶结合物；2)底物液TMB；以及3)洗涤液。6.一种牛IL-2的ELISPOT检测试剂盒，所述ELISPOT检测试剂盒包括：支持介质、捕获抗体、检测抗体、阴性对照和阳性对照，其中，所述捕获抗体为所述的杂交瘤细胞株3D8或其传代细胞株分泌产生的牛IL-2单克隆抗体MAb3D8，所述检测抗体为生物素标记牛IL-2单克隆抗体，其中，所述支持介质与试剂接触面上有PVDF膜，所述牛IL-2单克隆抗体MAb3D8与生物素标记牛IL-2单克隆抗体能同时与牛IL-2发生抗原抗体结合反应；所述捕获抗体包被在支持介质中或所述捕获抗体与支持介质分别放置。7.根据权利要求6所述ELISPOT检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记牛IL-2单克隆抗体为由杂交瘤细胞株6D7或其传代细胞株分泌产生的单克隆抗体MAb6D7。8.根据权利要求6-7任一项所述ELISPOT检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括下列试剂：1)亲和素-碱性磷酸酶结合物；2)底物液NBT/BCIP；以及3)洗涤液。9.一种牛IL-2的FCM检测试剂盒，所述FCM检测试剂盒包括异硫氰酸荧光素标记的牛IL-2单克隆抗体，其中，所述异硫氰酸荧光素标记的牛IL-2单克隆抗体为牛所述IL-2单克隆抗体MAb3D8；优选地，所述FCM检测试剂盒中还包括下列试剂：1)阻断剂Brefeldin(BFA)；2)APC标记针对牛CD4单抗；2CN105483090A权利要求书2/2页3)固定剂、破膜剂；以及4)洗涤液。10.根据权利要求1所述分泌牛IL-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D8或其传代细胞株，以及根据权利要求2所述的牛IL-2单克隆抗体MAb3D8在制备牛机体免疫状态的检测试剂或诊断试剂中的应用。11.权利要求3-9任一项所述试剂盒在用于非诊断目的检测牛